细胞养了2年了，没碰到过这样的情况，大家帮帮忙吧！

yuhaoze

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最近养癌细胞，出现问题：以前的做法是，加上胰酶洗一遍，再加胰酶消化，一直到漂，然后终止消化，细胞状态很好。现在同样的做法，不管消化多长时间，细胞都贴在那里不往下掉，一吹打细胞就碎，没一个活的。5 h5 N' ~- Z% `: H' f% D
不知道问题出在什么地方，怎么解决. H* l  D+ M( T7 X5 ~! }5 K
大家有没有遇到同样的问题

yuhaoze

回复 小猪快跑 的帖子
2 c6 x  Y: P( y2 y6 ?+ P
" l. W& ~6 W6 a+ L% r% @8 |嗯，谢谢！

小猪快跑

检验胰酶你可以用它消化一下别的细胞看好不好用啊。也有可能是细胞的问题呢，我以前养过MSC,跟你的情况一样，怎么消化都不下来，同实验室的用的都很好，自己消化别的细胞也没问题，我感觉是细胞可能有问题，但一直没找到原因。希望你的问题解决以后我以后也能做个参考！！

franklinhg

一般是胰酶问题，肿瘤细胞最好养了。

lugu167

我的作法是：小体积分装（比如10ml）， -20℃冻存， 一旦溶解存放4℃，一般一周内用完，从来没有出过问题。

dahui

回复 yuhaoze 的帖子. J; j( |* J. _1 [
3 \6 @8 R0 J: y0 D' a1 x
对呀，，没准谁用了你的胰酶，并且还没发回冰箱，结果发现后，偷偷给你放回去了，但是他却没告诉你这个经过。, j( Z8 K3 R+ v  m+ W

1 C: g8 y; ]& j6 P- E或者是细胞传代次数太多了，生长状态不行，我之前养的293T或vero，就是细胞状态很差时就会贴的死死的，消化不下来，如果加长消化时间，细胞是下来了，但是大部分都死了

happyab

你最好先确定胰酶是否过期失效或配比错误、甚至不同厂家都有可能！再确定陪养基的成分是否有和胰酶冲突的成分，陪养环境是非设定有误！如果都不是外围环境问题，就恭喜你发现稀有样品！

184lj

细胞状态不好的时候就会出现这种情况，比如老化，凋亡，或者是受到支原体的污染。

lchoxy

胰酶没问题的话，那就是细胞的问题，细胞老化了，或者是分化了，都会影响消化的。  v/ _) m- O- F) g4 j; F

wangzhiqi86

回复 yuhaoze 的帖子
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极有可能是胰酶时间长了之后失活所致，我之前也是在37℃预热时间长了之后细胞怎么也消化不下来，建议你再重新用胰酶粉末再过滤配一瓶试试，里面EDTA也要加的。
8 ]! ~& P- q6 f& b& P我的经验是，每次预热的时候，胰酶最后预热，不要超过5min，甚至可以放在室温一段时间就行。很多胰酶并不是在4℃放的时间长了失效的，而是经常性预热失活的。
/ j$ }5 p/ T8 N6 n! {8 l( G) f胰酶用的是Invitrogen的，一瓶粉末可以用很长时间。配成2×的过滤后分装冻存在-20℃，用的时候再解冻，一个月内没问题。