细胞养了2年了，没碰到过这样的情况，大家帮帮忙吧！

yuhaoze

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& U# y  G+ v2 m& W1 ~" x最近养癌细胞，出现问题：以前的做法是，加上胰酶洗一遍，再加胰酶消化，一直到漂，然后终止消化，细胞状态很好。现在同样的做法，不管消化多长时间，细胞都贴在那里不往下掉，一吹打细胞就碎，没一个活的。
$ L- `- S* u: y# {3 G9 U4 A不知道问题出在什么地方，怎么解决
" o8 M: y( m! E$ A" [$ {+ [; @大家有没有遇到同样的问题

coffee.cat105

你用的什么公司的胰酶、

yuhaoze

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( X1 l7 P9 L" W
: G4 Q2 b. b! R$ }( Zsigma,一直都是这个，你觉得是胰酶的问题？
# i1 F6 ^, z0 ~7 [

yuhaoze

回复 coffee.cat105 的帖子0 g9 J0 n' L. P6 E# @
; E/ Q! `3 I* n5 m6 r& v- T
加上之后倒还真是能看出来有点类似凋亡的特征，但实验室其他人说胰酶很好用啊

coffee.cat105

我们用Hhclone的胰酶也出了问题了，形态什么的都可以，就是流式检测抗体标记不上，正头大呢，所以问问你% F! x" p: u2 ~  w. ^. r( \

WAX

你的胰酶是不是粉末自己配制的，如果是，有可能是过保质期，胰酶失效了，消化能力差，损伤了细胞却消化不下来，我们以前遇到过类似的情况

yuhaoze

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$ r9 b, q% {" t: z9 W

# U) p* [, T  E# {, J: j6 E如果是这样的话那真需要警惕了

WAX

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# y2 r* z0 }4 d3 T
. a: ^5 n& t1 |, ]+ ?1 G- L0 }8 V4 j粉末也是会过期的，用个两年就差不多了，买一瓶新的吧

yuhaoze

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: f& z; [0 G, R  X8 z
, V3 e' _. d' p, E' ~, l, d% ?好的'谢谢

wangzhiqi86

回复 yuhaoze 的帖子. Q) j7 `4 r/ I! \8 b

& n3 Q" w) }% {7 _( U极有可能是胰酶时间长了之后失活所致，我之前也是在37℃预热时间长了之后细胞怎么也消化不下来，建议你再重新用胰酶粉末再过滤配一瓶试试，里面EDTA也要加的。
+ R9 X" s( D6 q( j' r我的经验是，每次预热的时候，胰酶最后预热，不要超过5min，甚至可以放在室温一段时间就行。很多胰酶并不是在4℃放的时间长了失效的，而是经常性预热失活的。
! s$ L. W; F3 B& ~胰酶用的是Invitrogen的，一瓶粉末可以用很长时间。配成2×的过滤后分装冻存在-20℃，用的时候再解冻，一个月内没问题。