对于DC细胞的一些疑问，请师兄解答!!

冠忠

我在文献中看到好多有关培养DC细胞及令DC细胞成熟的方法，我有以下几个问题，希望师兄可以帮忙解答，谢谢
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1.        我想知道，DC细胞培养是否跟普遍adherent细胞培养方法一样，长满了就可以做subculture?但是我见到有师兄说，有时间DC细胞是不会贴壁。$ y# V. O9 F% U$ N7 ]- Y* Z* |: {
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2.        一般来说，DC细胞可以增值多少代?如果用100毫升周边血，一开始应该用T25培养皿先培养吗?$ j9 C$ W* S: n0 z3 q, A, v2 f9 w

& N8 y% u0 x( p7 q* J3.        我想知道，现在文献说，用I=RPMI-1640, GM-CSF 和IL-4的培养液培养出的DC细胞是否叫Immature DC细胞>? 加了TNF-Alpha培养的是叫mature DC细胞? 对吗?
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4.        在文献中，我看到好多文献说，mature DC细胞先可以产生作用，那么如果用癌细胞的lysate和immature的DC细胞一起培养，出来的DC细胞和用cytokine-induced的mature DC 细胞在治疗上有什么不同? 那一个较好?; R- s. c$ Y$ A1 z2 M
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谢谢  {# {7 h0 j1 F  [) S, G

apai2003

1.不一样，DC不能算是贴壁细胞，我们只是利用单核细胞的贴壁性质将其（DC的前体细胞）纯化出来，再用GM-CSF 和IL-4诱导单核细胞向未成熟DC转化，在此转化过程中，未成熟DC会逐渐悬浮起来；+ x; R' G! L! ~0 K) G6 a% ]9 {
2.单核细胞来源的DC是不可以增值的，一个单核细胞只能转化成一个DC细胞；具体用多大瓶培养要看你拿到的PBMC数量（再细的话还可以考虑里面单核细胞的比例），我们一般按照3x10^6/ml的密度铺瓶，通常情况下，100ml外周血拿到1x10^8的PBMC应该没问题，可以采用T75培养瓶；, C' r) Y6 o3 b* y/ C" Q
3.成熟DC和未成熟DC不能简单按照加了什么因子来决定，目前主要根据细胞表型来判断，未成熟DC低表达CD80, CD86, 以及HLA-DR等，而成熟DC高表达CD80, CD86, 以及HLA-DR等，且表达DC成熟标志CD83，通常用GM-CSF 和IL-4来诱导单核细胞向未成熟DC转化，之后可以用TNF-Alpha来促使未成熟DC向成熟DC转化；( |! o% @; l. V7 V6 e' m/ L
4.没太明白你的意思，但目前临床治疗用的DC普遍都是负载特定肿瘤抗原的DC，这样回输后才可以诱导产生特异性的CTL抗肿瘤反应。

大少爷

用癌细胞的lysate和immature的DC细胞一起培养，出来的DC细胞和用cytokine-induced的mature DC 细胞在治疗上是不同的，负载特定肿瘤抗原的DC，效果好，回输后才可以诱导产生特异性的CTL抗肿瘤反应。

大少爷

用癌细胞的lysate和immature的DC细胞一起培养，出来的DC细胞和用cytokine-induced的mature DC 细胞在治疗上是不同的，负载特定肿瘤抗原的DC，效果好，回输后才可以诱导产生特异性的CTL抗肿瘤反应。

大少爷

用癌细胞的lysate和immature的DC细胞一起培养，出来的DC细胞和用cytokine-induced的mature DC 细胞在治疗上是不同的，负载特定肿瘤抗原的DC，效果好，回输后才可以诱导产生特异性的CTL抗肿瘤反应。

大少爷

用癌细胞的lysate和immature的DC细胞一起培养，出来的DC细胞和用cytokine-induced的mature DC 细胞在治疗上是不同的，负载特定肿瘤抗原的DC，效果好，回输后才可以诱导产生特异性的CTL抗肿瘤反应。9 |# e2 ~; Y) n: \) X% n1 w! f% }6 D

8 y, I6 X* n* r单核细胞向未成熟DC转化，在此转化过程中，未成熟的DC铁壁，成熟DC会逐渐悬浮起来。1 T2 D( L* T# x5 h

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大少爷

用癌细胞的lysate和immature的DC细胞一起培养，出来的DC细胞和用cytokine-induced的mature DC 细胞在治疗上是不同的，负载特定肿瘤抗原的DC，效果好，回输后才可以诱导产生特异性的CTL抗肿瘤反应。' M7 X" y: v5 y

; d) `! B  k$ i- S" n$ W单核细胞向未成熟DC转化，在此转化过程中，未成熟的DC铁壁，成熟DC会逐渐悬浮起来。
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冠忠

大少爷 发表于 2012-7-23 11:41 4 O: f) p4 V% Y
用癌细胞的lysate和immature的DC细胞一起培养，出来的DC细胞和用cytokine-induced的mature DC 细胞在治疗上 ...

0 g7 \8 m# I9 B- D! X$ S
谢谢师兄的解答。
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想请问一下，如果要用癌细胞的lysate，用加入TNF-alpha吗?因为用TNF-alpha可以令DC细胞成熟起来。% b$ S, N! }, @

8 F  X, r' O% ]& R# V# S; ]  w7 W3 F谢谢+ l, Y3 |: v. l8 h1 ?

冠忠

apai2003 发表于 2012-7-23 09:12 ( ]: z5 X4 f/ x
1.不一样，DC不能算是贴壁细胞，我们只是利用单核细胞的贴壁性质将其（DC的前体细胞）纯化出来，再用GM-CSF ...

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谢谢师兄的解答。, ]: W0 J/ W" B  k, f& j

- r: m# y% ~2 H2 ^想请问一下，如果要用癌细胞的lysate，用加入TNF-alpha吗?因为用TNF-alpha可以令DC细胞成熟起来。
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' T% m9 Z" U  D1 V6 M- _谢谢, e3 c: F5 M4 z7 J! }! b

大少爷

肯定要加