对于DC细胞的一些疑问，请师兄解答!!

冠忠

我在文献中看到好多有关培养DC细胞及令DC细胞成熟的方法，我有以下几个问题，希望师兄可以帮忙解答，谢谢5 z: G( b6 C8 H' O

* g) |5 R% ~3 p1 Y1.        我想知道，DC细胞培养是否跟普遍adherent细胞培养方法一样，长满了就可以做subculture?但是我见到有师兄说，有时间DC细胞是不会贴壁。7 K+ ]! k1 A' h: k8 ~1 A: t

- d. n* ?2 X0 t3 n. {" Z2.        一般来说，DC细胞可以增值多少代?如果用100毫升周边血，一开始应该用T25培养皿先培养吗?0 Y* j; `; r( L
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3.        我想知道，现在文献说，用I=RPMI-1640, GM-CSF 和IL-4的培养液培养出的DC细胞是否叫Immature DC细胞>? 加了TNF-Alpha培养的是叫mature DC细胞? 对吗?6 S3 y! K" ^; o

2 d0 n1 W& a% W0 X" D4.        在文献中，我看到好多文献说，mature DC细胞先可以产生作用，那么如果用癌细胞的lysate和immature的DC细胞一起培养，出来的DC细胞和用cytokine-induced的mature DC 细胞在治疗上有什么不同? 那一个较好?
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谢谢
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apai2003

1.不一样，DC不能算是贴壁细胞，我们只是利用单核细胞的贴壁性质将其（DC的前体细胞）纯化出来，再用GM-CSF 和IL-4诱导单核细胞向未成熟DC转化，在此转化过程中，未成熟DC会逐渐悬浮起来；/ m1 C2 e( _& n) V3 Z: T, x
2.单核细胞来源的DC是不可以增值的，一个单核细胞只能转化成一个DC细胞；具体用多大瓶培养要看你拿到的PBMC数量（再细的话还可以考虑里面单核细胞的比例），我们一般按照3x10^6/ml的密度铺瓶，通常情况下，100ml外周血拿到1x10^8的PBMC应该没问题，可以采用T75培养瓶；% t8 R/ |$ J( l' s
3.成熟DC和未成熟DC不能简单按照加了什么因子来决定，目前主要根据细胞表型来判断，未成熟DC低表达CD80, CD86, 以及HLA-DR等，而成熟DC高表达CD80, CD86, 以及HLA-DR等，且表达DC成熟标志CD83，通常用GM-CSF 和IL-4来诱导单核细胞向未成熟DC转化，之后可以用TNF-Alpha来促使未成熟DC向成熟DC转化；! P3 _; ^0 `  ^) f
4.没太明白你的意思，但目前临床治疗用的DC普遍都是负载特定肿瘤抗原的DC，这样回输后才可以诱导产生特异性的CTL抗肿瘤反应。

大少爷

用癌细胞的lysate和immature的DC细胞一起培养，出来的DC细胞和用cytokine-induced的mature DC 细胞在治疗上是不同的，负载特定肿瘤抗原的DC，效果好，回输后才可以诱导产生特异性的CTL抗肿瘤反应。

大少爷

用癌细胞的lysate和immature的DC细胞一起培养，出来的DC细胞和用cytokine-induced的mature DC 细胞在治疗上是不同的，负载特定肿瘤抗原的DC，效果好，回输后才可以诱导产生特异性的CTL抗肿瘤反应。

大少爷

用癌细胞的lysate和immature的DC细胞一起培养，出来的DC细胞和用cytokine-induced的mature DC 细胞在治疗上是不同的，负载特定肿瘤抗原的DC，效果好，回输后才可以诱导产生特异性的CTL抗肿瘤反应。

大少爷

用癌细胞的lysate和immature的DC细胞一起培养，出来的DC细胞和用cytokine-induced的mature DC 细胞在治疗上是不同的，负载特定肿瘤抗原的DC，效果好，回输后才可以诱导产生特异性的CTL抗肿瘤反应。
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单核细胞向未成熟DC转化，在此转化过程中，未成熟的DC铁壁，成熟DC会逐渐悬浮起来。
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大少爷

用癌细胞的lysate和immature的DC细胞一起培养，出来的DC细胞和用cytokine-induced的mature DC 细胞在治疗上是不同的，负载特定肿瘤抗原的DC，效果好，回输后才可以诱导产生特异性的CTL抗肿瘤反应。
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单核细胞向未成熟DC转化，在此转化过程中，未成熟的DC铁壁，成熟DC会逐渐悬浮起来。
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冠忠

大少爷 发表于 2012-7-23 11:41
+ d' J1 A. p$ K: N5 ^用癌细胞的lysate和immature的DC细胞一起培养，出来的DC细胞和用cytokine-induced的mature DC 细胞在治疗上 ...

5 f! s/ q# x" K. H$ s6 r谢谢师兄的解答。
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& P" ]9 A+ G% o) `7 `; N想请问一下，如果要用癌细胞的lysate，用加入TNF-alpha吗?因为用TNF-alpha可以令DC细胞成熟起来。
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谢谢
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冠忠

apai2003 发表于 2012-7-23 09:12 4 ~/ {7 F  I; D) v
1.不一样，DC不能算是贴壁细胞，我们只是利用单核细胞的贴壁性质将其（DC的前体细胞）纯化出来，再用GM-CSF ...

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谢谢师兄的解答。
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想请问一下，如果要用癌细胞的lysate，用加入TNF-alpha吗?因为用TNF-alpha可以令DC细胞成熟起来。
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& ?. O# }2 L) a) r) C8 B谢谢
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大少爷

肯定要加