关于bFGF配制

huangcong1988

买的peprotech的生长因子bFGF，说明书上写的是用5mM Tris，PH7.6 溶，如果想冻存在负20或者负80的话，就加0.1%的BSA。但是我看坛子里面有战友说可以直接用PBS溶或者直接用超纯水溶。还有战友说保存的话直接用0.1%的BSA溶。我想知道能不能先配好BSA，然后将生长因子溶到BSA中（不用Tris 盐酸配），然后分装后冻存，这样可以吗？还有就是BSA浓度一定要0.1%吗？我用0.15%的行不行？
3 {" W6 K" o# h$ c+ u
4 m, x1 }0 R7 {( H补充内容 (2012-7-25 09:03):, q' o6 E: a5 I+ e- _
说明书上写：reconstitute in 5mM Tris ，PH 7.6 。for extended storage， further dilute in a buffer containing 0.1%BSA（or more）。这里，是先要溶解到Tris盐酸，再溶解到BSA中才能冻存是吧？

flydayzhu

BSA加高一点没问题的，主要是增大蛋白浓度防止bFGF变性的~~~一般我们是用PBS+0.1%BSA将其配成10000x的储液然后分装冻存，用的时候就化一个，一般一周左右用完一个~

天枰2012

BSA可以防止bFGF降解，是保护剂。可以像你说的那样

寒山拾得

CF （carrier free）的用PBS+0.1%BSA溶解，
4 I: |1 U9 q" B3 z有的自带carrier（BSA）冻干的，用PBS溶就可以。

huangcong1988

回复 flydayzhu 的帖子
' |( J3 R( B, A( C2 Y5 j0 N* B5 Y3 G7 K5 {4 B# F) T0 i  ^+ M6 `% E
是peprotech的吗？说明书上是写用Tris 盐酸啊，那溶解的时候是不是是不是也应该用Tris 盐酸呢？还有就是直接用配好的BSA（0.1%）溶bFGF呢？

huangcong1988

回复 flydayzhu 的帖子0 X" g. {% {+ M5 R

. z: ^: K. G; Y; k$ v6 v7 T说明书上写：reconstitute in 5mM Tris ，PH 7.6 。for extended storage， further dilute in a buffer containing 0.1%BSA（or more）。这里，是先要溶解到Tris盐酸，再溶解到BSA中才能冻存是吧？

huangcong1988

回复 flydayzhu 的帖子
* b  X6 c2 l+ j  w
9 A- D8 V1 `/ o+ Q/ P还有一点就是我BSA是先配好的，如果先用Tris盐酸配bFGF，再把BSA加到bFGF中，那bFGF跟BSA的浓度不是都会减低吗？

huangcong1988

回复 flydayzhu 的帖子4 O5 P- H' Q! N7 j3 f+ t+ H
( N& V+ \1 {3 y# [5 |2 F/ e
说明书上的推荐浓度是0.1~1mg每ml，总共10μg，那么加100μl的buffer就够了？

flydayzhu

回复 huangcong1988 的帖子; Y- E( Z+ {* Q7 Z# v1 y

4 x) d$ g( t: p! {/ s; r用过peprotech的，也用过其他公司的，个人觉得pH在那的话影响不会特别大，然后一次不要溶太多~~~先配好0.1%BSA再溶解吧~~

flydayzhu

回复 huangcong1988 的帖子0 |% R" C, ]7 ~: k0 I0 Z
1 D2 C6 {9 l# T5 N8 c0 k3 b
加100ul含0.1%BSA的buffer