再发图！用Ficoll分离脐血后的效果（15ml和50ml离心管）

huajie881026

前不久，做脐血MSC分离，用50ml离心管分离后，白膜层不清晰，故发了一帖http://www.stemcell8.cn/thread-58525-1-1.html
0 z5 V6 o' V% r* J! c3 e昨日又做了一次，分别用50ml和15ml离心管都做了，还是按Ficoll说明书来，500g  20℃  30分钟，结果50ml管还是“白雾”层，15ml就是大家所谓的“白膜”层（下图），可见是离心管的不同导致了分离后分层的区别。
' Y: J" ]) z3 z8 F/ Z可问题又来了，我100ml脐血，用100mlPBS稀释，再用100mlFicoll分离，这得要20个15ml离心管来分离啊，这得多浪费啊。不管怎么样，我还是用50ml的离心管先做了，我相信能得到MSC！！！) \3 {2 D  }7 C' S; v

" h; Q) I8 b, ~3 h

huajie881026

嗯  下次我再改进，用700g以上再试试。, R& o" _! S4 m1 d* u2 S4 D
我一直用500g，30min，一方面是Ficoll说明书上这么说，一方面是下面一篇文献上也是这么做的/ M+ T) s7 X; c; l) y6 F' x
他做了四百多分脐血，最后发现＞90ml脐血和2小时内操作是成功的关键
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huajie881026

sdwzg119 发表于 2012-8-2 14:56 % B' e" N0 X+ j- e% {. ^
Ficoll是国产的还是进口的？？我对比过国产淋巴细胞分离液和进口的之间的区别，进口的明显比国产的好的多！ ...

/ i: G+ Y9 J& ]. i# T. u& T8 S进口的，GE的，2000+才600ml，分一次要用100ml，所以分一次心疼啊

huajie881026

xuehu20 发表于 2012-8-2 14:48 5 {# H) Q3 ]5 {3 R  ^  q& Q
回复 huajie881026 的帖子
' M0 w' B: l2 v2 y( }# J! M1 B, e0 ?, J  }
你好，请问你说的文献有原文吗，能给我一份吗，谢谢

6 U8 P) e7 b& `6 q) W- o" C' G  x
此贴可下载
. R" o4 W0 n/ V; o& w9 Ghttp://www.stemcell8.cn/thread-58705-1-1.html

huajie881026

pailishi 发表于 2012-8-7 17:13
6 t9 ?! n5 l& G( g% {/ K我跟你一样分的，但是我用EGM-2要养的是EPC ，最可恨的是经常被MSC克隆污染，而且这个MSC克隆增殖奇快无比， ...

$ C0 n5 z; _* ?5 k" p; JMSC在EGM-2里养的活？其实应该养的活，只要血清好。
, ]1 K" t# o4 s& E  O$ _( D你养EPC可以试试脐带的或者外周血的嘛！那样被MSC污染会低一点！
2 m5 N3 Z% B$ P8 a- ?哦  对了  你用的EGM-2里加什么生长因子吗？血清用的啥牌子的？我以后可能会要养EPC
7 B7 f# A3 q; t请教了！

huajie881026

pailishi 发表于 2012-8-8 09:03
4 A6 m+ l9 E* b* Z1 b- _- R" |EGM-2用的就是商品化的成品，相关因子和血清都是配套好了的哦4 N9 A" s! A8 c, V
脐带里面的指的是脐静脉内皮细胞吗？外周血E ...

/ ]& i" n8 y  }3 j嗯，就是指脐静脉血管内皮祖细胞。外周血的EPC含量的确比较低，不过我印象中看到一篇奥地利的文献是关于外周血大量扩增EPC的，现在一时找不到了。。。

huajie881026

pailishi 发表于 2012-8-8 10:45 3 _* l6 ?( h1 y* S
有一个带视频的关于外周血大量扩增EPC的文章吧，有点难度

, W* |. N% A/ O
刚搜了下JOVE，看了那个视频，震惊了，最后她用的扩增细胞的培养容器也太大了点了吧！不过她说成功率有50%-70%，只是主要取决于供体血中有无EPC。
) R) O: e, o5 y3 l以后如果我也要养EPC，还望你指点啊！

huajie881026

vanessa 发表于 2012-8-8 16:37 $ W8 j$ m5 G) D  `/ d
你用的Ficoll也太多了吧。我们一般稀释过的血：Ficoll=2：1.我觉得操作的时候注意缓慢将稀释后的血细胞加入 ...

5 _: e# M2 I: X. M/ K# b- V  M因为说明书和论坛里都是这么做的，我也想省点ficoll，以后我就按你的比例吧。。。

huajie881026

透明之蓝 发表于 2012-8-7 16:41
: G. G+ i7 g6 D3 i. b8 O) j3 K同样的分离液，15cm的肯定分离效果更好。
$ \! n: J+ ]' s# |. v肯花2000元买分离液，看来你是在搞科研，而且，脐血的MSC含量 ...

( R% ]+ f1 H& h9 d% M4 A4 |
出来了一点梭型细胞（有待鉴定），但是杂细胞很多: t  {% i' }' X3 P
http://www.stemcell8.cn/thread-59259-1-1.html

huajie881026

回复 qiugt0819 的帖子* F9 G) a- E* K" ~  \2 \- k+ x
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是的，红色的点可能是血小板，因为血小板也在血清与ficoll之间！