骨髓间充质干细胞相关问题讨论

wcforever126

小弟最近再做病人骨髓间充质干细胞培养，看了一些资料，分享一下8 w0 o+ ^) J/ l% B# n2 g
1、骨髓间充质干细胞在骨髓中含量很少，大概10的6次方骨髓单个核细胞中仅含有2-5个MSCs，故接种密度一般要在10的6次方；
- a$ e! i* [- U, W- W( L2、MSCs三天后明显看到贴壁，48小时有贴壁，7天可看到很多梭形细胞；3 m( {. t. c) G0 i4 n
3、液体培养基中的L-谷氨酰胺在你打开培养瓶盖时候大概2周会代谢消失，所以要记得2周用不完要添加  X0 O8 d  T0 O+ M- J* C
4、血清一定要分装，不能一整瓶今天化了，明天再冻；$ Z9 p- B, r; n+ |: U$ L6 N7 Z
5、配好的培养基一定两周内用完，2-8度保存。
! F: h7 ]* F# B2 r3 T1 J4 q+ {各位高手给些意见，及你实验过程中注意事项。

wcforever126

人气不高啊，看完整个帖子，基本没发现关于人骨髓间充质干细胞方面的，故发此贴。

wcforever126

小弟刚开始做，可能好多写的东西不对，望各位前辈指证。
1 o8 `  V2 x; E1 P首先从分离细胞说起吧，
( Z0 C6 q7 ~8 D4 e$ i+ j, c我们实验室主要用F-P 1.077分离骨髓间充质干细胞，主要步骤如下，6 S* }' U- U9 @" t) V
1、骨刺5ml病人骨髓液，等比例PBS混匀；
) w% k: |* c) h1 R' o, I2、F-P比稀释后骨髓液1:1或1:2，一定要小心
7 j% k- t+ W& S( ^- k$ P; n' u3、800g。20分钟，20度/ z' I2 K2 J* Y. o
4、白膜层，稀释3倍体积的F-P体积
& x( Z# `+ ]' n+ J5、300g,10分钟，4度，重复一次' X* R. P0 |5 Z- k
6、接种密度5*10的6次方。

wcforever126

今天说下无菌观念吧
: H& S! {$ @" l+ j" W1、进实验室要换鞋，洗手，尽管您要戴手套也要洗手，穿工作衣，最好穿长裤到脚跟；
' r# e; d/ @: c9 G. n2、打开超净台紫外灯30-60分钟消毒，这段时间可以把分离液及培养基从4度冰箱拿出放置室温，30-60分钟后基本上恢复室温，不用再在水浴锅里预热，防止不必要的污染。通风10分钟即可开始实验。5 ?: G7 i; ^1 J/ ^; _# R
3、酒精消毒超净台面，外拿进来的物品酒精喷洒消毒，至于是否点酒精灯的问题，保留个人意见。! _* A% \9 H! b) e/ k% q
4、操作过程中，不要混用枪头，最好自己的枪头前一天消毒，实验室人多混杂，注意保护。

wcforever126

关于接种密度问题, i6 a3 ^) @. L% Q9 b" q
1、如果你用了细胞因子之类的，可以10的5次方/ml接种
! ?: ?; P2 z/ J! a. Z0 x9 ]2、如果没加细胞因子，可以10的6次方接种。

ffkkk2007

楼主精神可嘉，我也说一个：间充质干细胞培养应当使用树脂培养瓶，比用玻璃培养瓶的效果好很多

wcforever126

回复 ffkkk2007 的帖子+ X7 Y; S( [9 y
) {& o  b. @9 O( C7 J0 E
有利于贴壁，最好用进口的。

firstaider

从安全性角度出发BM-MSC我个人认为前景更好，当然必须是自体的，通过体外扩增的，目前体外扩增的技术都不怎么好，希望有人有更好的建议

lindanmiaoyao

你们都是做人的BM-MSC吗？有没有做猴子的？

细胞海洋

回复 lindanmiaoyao 的帖子8 J- `# c% }) L! h4 J) {
% x* G2 {& f+ p4 B+ |9 Z
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