骨髓间充质干细胞相关问题讨论

wcforever126

小弟最近再做病人骨髓间充质干细胞培养，看了一些资料，分享一下
& Y) ^2 ^, V: ]8 |( u; N9 b1、骨髓间充质干细胞在骨髓中含量很少，大概10的6次方骨髓单个核细胞中仅含有2-5个MSCs，故接种密度一般要在10的6次方；* G0 S# }# p" J+ @# s6 U' q
2、MSCs三天后明显看到贴壁，48小时有贴壁，7天可看到很多梭形细胞；
7 o: ^# b; Y5 j$ T1 O3 R6 c" Q3、液体培养基中的L-谷氨酰胺在你打开培养瓶盖时候大概2周会代谢消失，所以要记得2周用不完要添加
+ p! [) E4 h2 ^* l+ P# [5 E4、血清一定要分装，不能一整瓶今天化了，明天再冻；6 }) x" o% f; m+ e8 `" |) z# I! k2 t2 v
5、配好的培养基一定两周内用完，2-8度保存。) R8 ^. [7 V$ {
各位高手给些意见，及你实验过程中注意事项。

winstonsee

没有讲怎么分离的，什么分离胶？如何纯化，有没有做表面抗原鉴定

lindanmiaoyao

回复 细胞海洋 的帖子' D0 ~( C# r9 C
$ [# n3 ?, v: r* R& e- _
好的，谢谢楼主

细胞海洋

回复 lindanmiaoyao 的帖子( s& O/ r: n' e  e3 G; Y

7 ~$ \4 m  d3 {3 g0 S建议你发新帖提问

lindanmiaoyao

你们都是做人的BM-MSC吗？有没有做猴子的？

firstaider

从安全性角度出发BM-MSC我个人认为前景更好，当然必须是自体的，通过体外扩增的，目前体外扩增的技术都不怎么好，希望有人有更好的建议

wcforever126

回复 ffkkk2007 的帖子3 G2 g: K1 |( L9 g+ N/ _2 B
1 h$ d( S% E( |1 s' k3 p$ B* `9 R9 g
有利于贴壁，最好用进口的。

ffkkk2007

楼主精神可嘉，我也说一个：间充质干细胞培养应当使用树脂培养瓶，比用玻璃培养瓶的效果好很多

wcforever126

关于接种密度问题
* S: K  g7 M4 z8 [$ T* i! u, F1、如果你用了细胞因子之类的，可以10的5次方/ml接种; W+ l! h! x# t3 l9 G* `, y+ C! C
2、如果没加细胞因子，可以10的6次方接种。

wcforever126

今天说下无菌观念吧3 m8 x) h( k3 m$ @8 M3 T
1、进实验室要换鞋，洗手，尽管您要戴手套也要洗手，穿工作衣，最好穿长裤到脚跟；; T% V& ~$ R. d
2、打开超净台紫外灯30-60分钟消毒，这段时间可以把分离液及培养基从4度冰箱拿出放置室温，30-60分钟后基本上恢复室温，不用再在水浴锅里预热，防止不必要的污染。通风10分钟即可开始实验。
3 e% S6 G2 ^# |3、酒精消毒超净台面，外拿进来的物品酒精喷洒消毒，至于是否点酒精灯的问题，保留个人意见。/ q: Z$ H1 A: \, ]
4、操作过程中，不要混用枪头，最好自己的枪头前一天消毒，实验室人多混杂，注意保护。