骨髓间充质干细胞相关问题讨论

wcforever126

小弟最近再做病人骨髓间充质干细胞培养，看了一些资料，分享一下
& J* [9 W7 `- H+ H4 o: G- Q1、骨髓间充质干细胞在骨髓中含量很少，大概10的6次方骨髓单个核细胞中仅含有2-5个MSCs，故接种密度一般要在10的6次方；
5 @+ `) Y* x9 J, l- D: {) M2、MSCs三天后明显看到贴壁，48小时有贴壁，7天可看到很多梭形细胞；1 h3 z; W3 d# }6 [3 n( U# N
3、液体培养基中的L-谷氨酰胺在你打开培养瓶盖时候大概2周会代谢消失，所以要记得2周用不完要添加# Z& I( \1 J0 \  P8 K: u9 E( }
4、血清一定要分装，不能一整瓶今天化了，明天再冻；0 O/ M: }' ?1 \7 m
5、配好的培养基一定两周内用完，2-8度保存。7 e( ^4 K, j) e% v) }
各位高手给些意见，及你实验过程中注意事项。

wcforever126

人气不高啊，看完整个帖子，基本没发现关于人骨髓间充质干细胞方面的，故发此贴。

wcforever126

小弟刚开始做，可能好多写的东西不对，望各位前辈指证。
0 n5 N0 Y0 C: a" I5 v# K$ s首先从分离细胞说起吧，) d0 {7 A/ |- P3 ~, h! f9 k  C
我们实验室主要用F-P 1.077分离骨髓间充质干细胞，主要步骤如下，3 |. a" k( [; t4 J6 D  k
1、骨刺5ml病人骨髓液，等比例PBS混匀；$ N" K6 H' y0 f
2、F-P比稀释后骨髓液1:1或1:2，一定要小心9 K4 z4 L' @$ F8 i2 p+ d
3、800g。20分钟，20度
  [# ^9 j, j* i5 U9 p9 M2 P" n4、白膜层，稀释3倍体积的F-P体积
+ j. l. d9 K/ d0 p  j  [* I. P: y5、300g,10分钟，4度，重复一次. g9 c9 o* _3 \9 s3 N
6、接种密度5*10的6次方。

wcforever126

今天说下无菌观念吧3 Z4 `* ^, h% P+ }
1、进实验室要换鞋，洗手，尽管您要戴手套也要洗手，穿工作衣，最好穿长裤到脚跟；' i1 A  m0 W. D' A4 D, T* {/ U" a* y" e
2、打开超净台紫外灯30-60分钟消毒，这段时间可以把分离液及培养基从4度冰箱拿出放置室温，30-60分钟后基本上恢复室温，不用再在水浴锅里预热，防止不必要的污染。通风10分钟即可开始实验。4 R. k! I. z2 W9 N! M' `
3、酒精消毒超净台面，外拿进来的物品酒精喷洒消毒，至于是否点酒精灯的问题，保留个人意见。
! o6 V1 n5 f7 x/ B7 C0 V+ F- a4、操作过程中，不要混用枪头，最好自己的枪头前一天消毒，实验室人多混杂，注意保护。

wcforever126

关于接种密度问题) r: X/ u. ^; k9 L. e! o
1、如果你用了细胞因子之类的，可以10的5次方/ml接种
$ B6 `/ u  M% h' W7 j' y8 G2、如果没加细胞因子，可以10的6次方接种。

ffkkk2007

楼主精神可嘉，我也说一个：间充质干细胞培养应当使用树脂培养瓶，比用玻璃培养瓶的效果好很多

wcforever126

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' P# }% L0 U! U+ D
) m$ W4 F) F0 n1 ]0 O$ O7 I5 L0 c, g有利于贴壁，最好用进口的。

firstaider

从安全性角度出发BM-MSC我个人认为前景更好，当然必须是自体的，通过体外扩增的，目前体外扩增的技术都不怎么好，希望有人有更好的建议

lindanmiaoyao

你们都是做人的BM-MSC吗？有没有做猴子的？

细胞海洋

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& R: p2 N0 X/ l/ k, Z$ V& `; M+ ]/ k% U建议你发新帖提问