骨髓间充质干细胞相关问题讨论

wcforever126

小弟最近再做病人骨髓间充质干细胞培养，看了一些资料，分享一下
& z# B5 G8 u1 }' |. D1 j1、骨髓间充质干细胞在骨髓中含量很少，大概10的6次方骨髓单个核细胞中仅含有2-5个MSCs，故接种密度一般要在10的6次方；
3 l" Y" J; E* o) `2 T, L5 ]1 }9 U2、MSCs三天后明显看到贴壁，48小时有贴壁，7天可看到很多梭形细胞；
; q/ T" \: E; w3、液体培养基中的L-谷氨酰胺在你打开培养瓶盖时候大概2周会代谢消失，所以要记得2周用不完要添加3 g; N+ d* x- |+ Y- F5 K! {( N# B8 F
4、血清一定要分装，不能一整瓶今天化了，明天再冻；
' G* [1 A2 j9 z% c) ~4 Z) u9 |4 ?5、配好的培养基一定两周内用完，2-8度保存。
  T# p6 w/ i" K0 |" g% e各位高手给些意见，及你实验过程中注意事项。

wcforever126

人气不高啊，看完整个帖子，基本没发现关于人骨髓间充质干细胞方面的，故发此贴。

wcforever126

小弟刚开始做，可能好多写的东西不对，望各位前辈指证。
; t& C# \$ l. k* V' S% z% E" t首先从分离细胞说起吧，. R2 n$ ?& U) F
我们实验室主要用F-P 1.077分离骨髓间充质干细胞，主要步骤如下，& [7 t; {* s$ U  L! O; h+ e
1、骨刺5ml病人骨髓液，等比例PBS混匀；
: K! B# e/ \4 S2、F-P比稀释后骨髓液1:1或1:2，一定要小心# K1 m: W, X  v3 N2 b% ~; L
3、800g。20分钟，20度  s9 Y8 r4 q: o
4、白膜层，稀释3倍体积的F-P体积
/ M8 ]" o( f- e8 c" h5、300g,10分钟，4度，重复一次2 D9 R4 `& ^: O, M/ [& d, d) F
6、接种密度5*10的6次方。

wcforever126

今天说下无菌观念吧
+ K. f2 a( }+ l* r: e  N% l1、进实验室要换鞋，洗手，尽管您要戴手套也要洗手，穿工作衣，最好穿长裤到脚跟；
# d& W3 u6 @- O: d7 T9 q" s: Z) N  D0 s2、打开超净台紫外灯30-60分钟消毒，这段时间可以把分离液及培养基从4度冰箱拿出放置室温，30-60分钟后基本上恢复室温，不用再在水浴锅里预热，防止不必要的污染。通风10分钟即可开始实验。" f$ a! S; H2 U* _) C+ w7 K
3、酒精消毒超净台面，外拿进来的物品酒精喷洒消毒，至于是否点酒精灯的问题，保留个人意见。" A! v0 ~7 N" O" k7 D: f8 C$ Q$ E
4、操作过程中，不要混用枪头，最好自己的枪头前一天消毒，实验室人多混杂，注意保护。

wcforever126

关于接种密度问题3 ]: D7 v* m2 Y$ L* a
1、如果你用了细胞因子之类的，可以10的5次方/ml接种
% G4 b8 z) l( v0 w  N2 ]2、如果没加细胞因子，可以10的6次方接种。

ffkkk2007

楼主精神可嘉，我也说一个：间充质干细胞培养应当使用树脂培养瓶，比用玻璃培养瓶的效果好很多

wcforever126

回复 ffkkk2007 的帖子1 L: K2 U1 \* ^, M, y: c
1 ?+ W  Q6 G: z, l+ l& _
有利于贴壁，最好用进口的。

firstaider

从安全性角度出发BM-MSC我个人认为前景更好，当然必须是自体的，通过体外扩增的，目前体外扩增的技术都不怎么好，希望有人有更好的建议

lindanmiaoyao

你们都是做人的BM-MSC吗？有没有做猴子的？

细胞海洋

回复 lindanmiaoyao 的帖子
" y: }% R7 G8 t/ ]
' f: U! K( q9 y4 U" o$ K, ?建议你发新帖提问