骨髓间充质干细胞相关问题讨论

wcforever126

小弟最近再做病人骨髓间充质干细胞培养，看了一些资料，分享一下
0 a3 ^& i3 M  O. Q; H1 Y, N1、骨髓间充质干细胞在骨髓中含量很少，大概10的6次方骨髓单个核细胞中仅含有2-5个MSCs，故接种密度一般要在10的6次方；
3 k$ T" L8 C% A* h2、MSCs三天后明显看到贴壁，48小时有贴壁，7天可看到很多梭形细胞；: R+ s. n1 Q# t2 h# b$ r* s# {+ w
3、液体培养基中的L-谷氨酰胺在你打开培养瓶盖时候大概2周会代谢消失，所以要记得2周用不完要添加
# |' I5 n' v# `3 e1 b4、血清一定要分装，不能一整瓶今天化了，明天再冻；
  q$ r6 g- n  [1 w% f5、配好的培养基一定两周内用完，2-8度保存。
4 R' j1 J1 J( V: w0 Y各位高手给些意见，及你实验过程中注意事项。

wcforever126

人气不高啊，看完整个帖子，基本没发现关于人骨髓间充质干细胞方面的，故发此贴。

wcforever126

小弟刚开始做，可能好多写的东西不对，望各位前辈指证。
% v& d; M2 }; s, r* O首先从分离细胞说起吧，
* m: e' F, @% z* L( F! z我们实验室主要用F-P 1.077分离骨髓间充质干细胞，主要步骤如下，4 ^+ u3 p  B# ?  c" T- O
1、骨刺5ml病人骨髓液，等比例PBS混匀；
7 t: _- u7 ]) V! R# T% _4 e, o( p2、F-P比稀释后骨髓液1:1或1:2，一定要小心
! \0 r* v$ Y9 w: j2 t3、800g。20分钟，20度
+ \; F3 F# a# X' n. _: c4、白膜层，稀释3倍体积的F-P体积3 S( z$ G8 |- H" L2 m# O7 Z- L; k
5、300g,10分钟，4度，重复一次) N' n8 M9 \4 D& c4 q/ U) D( R# a  w! t
6、接种密度5*10的6次方。

wcforever126

今天说下无菌观念吧
7 A% d3 B7 b, j4 H1、进实验室要换鞋，洗手，尽管您要戴手套也要洗手，穿工作衣，最好穿长裤到脚跟；/ x# F. r: M1 [) O3 t7 Y
2、打开超净台紫外灯30-60分钟消毒，这段时间可以把分离液及培养基从4度冰箱拿出放置室温，30-60分钟后基本上恢复室温，不用再在水浴锅里预热，防止不必要的污染。通风10分钟即可开始实验。. B. A9 G  t( n+ [- l
3、酒精消毒超净台面，外拿进来的物品酒精喷洒消毒，至于是否点酒精灯的问题，保留个人意见。% E' Z$ p: _1 d3 K8 N
4、操作过程中，不要混用枪头，最好自己的枪头前一天消毒，实验室人多混杂，注意保护。

wcforever126

关于接种密度问题  \+ [1 \0 p5 O; I
1、如果你用了细胞因子之类的，可以10的5次方/ml接种& R* q2 Z% o( k6 l/ G7 z
2、如果没加细胞因子，可以10的6次方接种。

ffkkk2007

楼主精神可嘉，我也说一个：间充质干细胞培养应当使用树脂培养瓶，比用玻璃培养瓶的效果好很多

wcforever126

回复 ffkkk2007 的帖子! F" q$ S. `3 t! D% w; u. I

9 _# p: A* e/ E: z有利于贴壁，最好用进口的。

firstaider

从安全性角度出发BM-MSC我个人认为前景更好，当然必须是自体的，通过体外扩增的，目前体外扩增的技术都不怎么好，希望有人有更好的建议

lindanmiaoyao

你们都是做人的BM-MSC吗？有没有做猴子的？

细胞海洋

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