骨髓间充质干细胞相关问题讨论

wcforever126

小弟最近再做病人骨髓间充质干细胞培养，看了一些资料，分享一下
- s, U9 p# Z( q1 r0 G" @1、骨髓间充质干细胞在骨髓中含量很少，大概10的6次方骨髓单个核细胞中仅含有2-5个MSCs，故接种密度一般要在10的6次方；0 g; C1 E0 Z) z0 L6 {1 o& i6 Y3 t: w$ [
2、MSCs三天后明显看到贴壁，48小时有贴壁，7天可看到很多梭形细胞；
9 a7 }1 l2 l* y% ]3 T3、液体培养基中的L-谷氨酰胺在你打开培养瓶盖时候大概2周会代谢消失，所以要记得2周用不完要添加3 P/ Y$ z' L' T: B3 Z1 S
4、血清一定要分装，不能一整瓶今天化了，明天再冻；  t4 o% f1 ]2 X
5、配好的培养基一定两周内用完，2-8度保存。6 J, C1 c- g* s" s" L: ~; \, k2 O$ k- H$ b
各位高手给些意见，及你实验过程中注意事项。

wcforever126

人气不高啊，看完整个帖子，基本没发现关于人骨髓间充质干细胞方面的，故发此贴。

wcforever126

小弟刚开始做，可能好多写的东西不对，望各位前辈指证。
; R: }$ ]# |& Y- Q( o& _) Y首先从分离细胞说起吧，2 L7 J$ ]+ `: s: R' N
我们实验室主要用F-P 1.077分离骨髓间充质干细胞，主要步骤如下，( a6 m% z$ E9 O1 _# e
1、骨刺5ml病人骨髓液，等比例PBS混匀；! B) ^5 w+ N4 P
2、F-P比稀释后骨髓液1:1或1:2，一定要小心
! C! ^: i- j1 ]$ v0 e; x' {8 c2 q3、800g。20分钟，20度# V. m; u$ k0 \. C
4、白膜层，稀释3倍体积的F-P体积, J1 n# J9 u0 C
5、300g,10分钟，4度，重复一次1 D! D" b8 @! O5 |! z% q  b0 o
6、接种密度5*10的6次方。

wcforever126

今天说下无菌观念吧
8 O1 B1 \) L* e1、进实验室要换鞋，洗手，尽管您要戴手套也要洗手，穿工作衣，最好穿长裤到脚跟；
( A# f; W+ V8 Y) v" y+ N$ }* J2、打开超净台紫外灯30-60分钟消毒，这段时间可以把分离液及培养基从4度冰箱拿出放置室温，30-60分钟后基本上恢复室温，不用再在水浴锅里预热，防止不必要的污染。通风10分钟即可开始实验。
: w. z4 `1 e0 G$ i! ?3、酒精消毒超净台面，外拿进来的物品酒精喷洒消毒，至于是否点酒精灯的问题，保留个人意见。% s% h0 B! g4 T  Y( B8 d1 e& t
4、操作过程中，不要混用枪头，最好自己的枪头前一天消毒，实验室人多混杂，注意保护。

wcforever126

关于接种密度问题
% Z+ V4 p: _+ X2 e. L2 R4 K1、如果你用了细胞因子之类的，可以10的5次方/ml接种/ i' L9 [3 V; S; l8 X- ^4 i/ v: t
2、如果没加细胞因子，可以10的6次方接种。

ffkkk2007

楼主精神可嘉，我也说一个：间充质干细胞培养应当使用树脂培养瓶，比用玻璃培养瓶的效果好很多

wcforever126

回复 ffkkk2007 的帖子! I/ ~' Y/ y* v" h' k8 Q

$ i( N3 v. C' H+ W/ W有利于贴壁，最好用进口的。

firstaider

从安全性角度出发BM-MSC我个人认为前景更好，当然必须是自体的，通过体外扩增的，目前体外扩增的技术都不怎么好，希望有人有更好的建议

lindanmiaoyao

你们都是做人的BM-MSC吗？有没有做猴子的？

细胞海洋

回复 lindanmiaoyao 的帖子5 Y& B" d! q/ N6 N; f  h! B

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