骨髓间充质干细胞相关问题讨论

wcforever126

小弟最近再做病人骨髓间充质干细胞培养，看了一些资料，分享一下6 D9 \  i6 g7 ]( H2 l) d2 ~
1、骨髓间充质干细胞在骨髓中含量很少，大概10的6次方骨髓单个核细胞中仅含有2-5个MSCs，故接种密度一般要在10的6次方；4 \' r. v/ Q  k! K. R
2、MSCs三天后明显看到贴壁，48小时有贴壁，7天可看到很多梭形细胞；
: e  c: U1 f% ?1 K* F3、液体培养基中的L-谷氨酰胺在你打开培养瓶盖时候大概2周会代谢消失，所以要记得2周用不完要添加; W* ^! E4 Z; `
4、血清一定要分装，不能一整瓶今天化了，明天再冻；
- z0 b9 s. O; C$ A5 a! p  D/ o* K5、配好的培养基一定两周内用完，2-8度保存。8 L" w0 Q# s7 \
各位高手给些意见，及你实验过程中注意事项。

winstonsee

没有讲怎么分离的，什么分离胶？如何纯化，有没有做表面抗原鉴定

lindanmiaoyao

回复 细胞海洋 的帖子
1 E( G4 C* m0 s( x) }
" Q4 @% O" p6 G, U好的，谢谢楼主

细胞海洋

回复 lindanmiaoyao 的帖子& V) b! v4 }" V) \0 h' e5 \
) M; k( g3 ~3 Z% g, \
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lindanmiaoyao

你们都是做人的BM-MSC吗？有没有做猴子的？

firstaider

从安全性角度出发BM-MSC我个人认为前景更好，当然必须是自体的，通过体外扩增的，目前体外扩增的技术都不怎么好，希望有人有更好的建议

wcforever126

回复 ffkkk2007 的帖子( e9 h) O, G$ N/ o0 R- ?6 {0 R
/ q/ K6 n3 d# a4 B/ u  ]; `7 h
有利于贴壁，最好用进口的。

ffkkk2007

楼主精神可嘉，我也说一个：间充质干细胞培养应当使用树脂培养瓶，比用玻璃培养瓶的效果好很多

wcforever126

关于接种密度问题& r' a8 G+ g( |$ E, ?; W
1、如果你用了细胞因子之类的，可以10的5次方/ml接种4 V( ]. d9 g4 K# E7 G
2、如果没加细胞因子，可以10的6次方接种。

wcforever126

今天说下无菌观念吧& p" c+ K: q! ]4 ?! t+ |4 w
1、进实验室要换鞋，洗手，尽管您要戴手套也要洗手，穿工作衣，最好穿长裤到脚跟；; G. u% X0 b7 H: T( a, w1 @1 b
2、打开超净台紫外灯30-60分钟消毒，这段时间可以把分离液及培养基从4度冰箱拿出放置室温，30-60分钟后基本上恢复室温，不用再在水浴锅里预热，防止不必要的污染。通风10分钟即可开始实验。
% W2 J0 T) ~3 |- w3、酒精消毒超净台面，外拿进来的物品酒精喷洒消毒，至于是否点酒精灯的问题，保留个人意见。2 O# O' t* _! Q- T4 ~- P
4、操作过程中，不要混用枪头，最好自己的枪头前一天消毒，实验室人多混杂，注意保护。