骨髓间充质干细胞相关问题讨论

wcforever126

小弟最近再做病人骨髓间充质干细胞培养，看了一些资料，分享一下
( s  j" e! E0 T; f1、骨髓间充质干细胞在骨髓中含量很少，大概10的6次方骨髓单个核细胞中仅含有2-5个MSCs，故接种密度一般要在10的6次方；
- \$ f3 A6 j4 B/ O# x2、MSCs三天后明显看到贴壁，48小时有贴壁，7天可看到很多梭形细胞；
" }; Q8 C; n0 v4 q! J$ H. ~# \3、液体培养基中的L-谷氨酰胺在你打开培养瓶盖时候大概2周会代谢消失，所以要记得2周用不完要添加
$ q) J  o& z9 }& Q9 C' Y" A, a3 x4、血清一定要分装，不能一整瓶今天化了，明天再冻；
% H& F( g! I! _, r5 R% R8 `% Y5、配好的培养基一定两周内用完，2-8度保存。
" `6 H8 @% ~3 R' g5 g+ t9 H5 Y各位高手给些意见，及你实验过程中注意事项。

wcforever126

人气不高啊，看完整个帖子，基本没发现关于人骨髓间充质干细胞方面的，故发此贴。

wcforever126

小弟刚开始做，可能好多写的东西不对，望各位前辈指证。
6 F7 h: r3 F: L8 I$ y* n2 f: f首先从分离细胞说起吧，
8 U8 e. j6 @9 t  H7 u我们实验室主要用F-P 1.077分离骨髓间充质干细胞，主要步骤如下，
( R+ q2 c3 K9 C: X6 o1、骨刺5ml病人骨髓液，等比例PBS混匀；
: V2 G; J, `! y& Z5 K. P. D( y$ M2、F-P比稀释后骨髓液1:1或1:2，一定要小心$ X& n! d+ r" E2 `2 p
3、800g。20分钟，20度* w5 S; k0 S% Y- X0 z
4、白膜层，稀释3倍体积的F-P体积
6 p$ R& }1 V' ]( V9 Q% x. J5、300g,10分钟，4度，重复一次. m! q6 ]- N! `9 _/ m, }& T
6、接种密度5*10的6次方。

wcforever126

今天说下无菌观念吧
% C( T# g% G6 J( w0 t' U* I1、进实验室要换鞋，洗手，尽管您要戴手套也要洗手，穿工作衣，最好穿长裤到脚跟；
  N6 N) ]! q% W& R. a: s. q+ ?2、打开超净台紫外灯30-60分钟消毒，这段时间可以把分离液及培养基从4度冰箱拿出放置室温，30-60分钟后基本上恢复室温，不用再在水浴锅里预热，防止不必要的污染。通风10分钟即可开始实验。
3 L' y; ]/ \* D' R/ @/ n: ^3、酒精消毒超净台面，外拿进来的物品酒精喷洒消毒，至于是否点酒精灯的问题，保留个人意见。7 c% y. I( w! v
4、操作过程中，不要混用枪头，最好自己的枪头前一天消毒，实验室人多混杂，注意保护。

wcforever126

关于接种密度问题% j/ K1 R8 i3 `5 i" U
1、如果你用了细胞因子之类的，可以10的5次方/ml接种, @9 I$ {; O/ b5 n- Q$ s
2、如果没加细胞因子，可以10的6次方接种。

ffkkk2007

楼主精神可嘉，我也说一个：间充质干细胞培养应当使用树脂培养瓶，比用玻璃培养瓶的效果好很多

wcforever126

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: z# p) \# V: J/ q; c- _6 Q6 k+ x/ J2 h* ~9 j1 h( A7 c
有利于贴壁，最好用进口的。

firstaider

从安全性角度出发BM-MSC我个人认为前景更好，当然必须是自体的，通过体外扩增的，目前体外扩增的技术都不怎么好，希望有人有更好的建议

lindanmiaoyao

你们都是做人的BM-MSC吗？有没有做猴子的？

细胞海洋

回复 lindanmiaoyao 的帖子% ?' S9 r/ t( U1 k* e3 v# S
1 H) `5 A! j: @4 \
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