骨髓间充质干细胞相关问题讨论

wcforever126

小弟最近再做病人骨髓间充质干细胞培养，看了一些资料，分享一下
+ ]5 Q# m$ I! H" H) l1、骨髓间充质干细胞在骨髓中含量很少，大概10的6次方骨髓单个核细胞中仅含有2-5个MSCs，故接种密度一般要在10的6次方；
! f% \# q7 w" z0 O2、MSCs三天后明显看到贴壁，48小时有贴壁，7天可看到很多梭形细胞；
$ b( D+ ]' d5 a' t) o- o3、液体培养基中的L-谷氨酰胺在你打开培养瓶盖时候大概2周会代谢消失，所以要记得2周用不完要添加
7 ^, c) a- `; {: F  s- ]# p7 a. Q4、血清一定要分装，不能一整瓶今天化了，明天再冻；! l* Z4 I$ S9 Y' z9 F
5、配好的培养基一定两周内用完，2-8度保存。
! g2 e" i$ y, ]4 f# _7 q各位高手给些意见，及你实验过程中注意事项。

wcforever126

人气不高啊，看完整个帖子，基本没发现关于人骨髓间充质干细胞方面的，故发此贴。

wcforever126

小弟刚开始做，可能好多写的东西不对，望各位前辈指证。
4 O- _- l* N5 \! k" X9 T  `% i2 D5 e首先从分离细胞说起吧，7 X# i% o' D) T7 F; \
我们实验室主要用F-P 1.077分离骨髓间充质干细胞，主要步骤如下，
  o; ?: v; T! ~) Q# G) D1、骨刺5ml病人骨髓液，等比例PBS混匀；
% R# R; `& I+ p' U2、F-P比稀释后骨髓液1:1或1:2，一定要小心/ n* ?' ?3 s5 j3 }9 h* C
3、800g。20分钟，20度, O! ^5 o" [' W  n3 N: a5 F
4、白膜层，稀释3倍体积的F-P体积2 B6 x/ T5 t4 G- h/ P
5、300g,10分钟，4度，重复一次6 w5 ]% F7 Q3 ?1 w
6、接种密度5*10的6次方。

wcforever126

今天说下无菌观念吧7 k. _; o$ K. w! ^$ @3 [! c5 |
1、进实验室要换鞋，洗手，尽管您要戴手套也要洗手，穿工作衣，最好穿长裤到脚跟；7 j1 c8 }8 X7 D
2、打开超净台紫外灯30-60分钟消毒，这段时间可以把分离液及培养基从4度冰箱拿出放置室温，30-60分钟后基本上恢复室温，不用再在水浴锅里预热，防止不必要的污染。通风10分钟即可开始实验。6 `3 ?$ Q7 Y, _4 r1 L. Z  T  u
3、酒精消毒超净台面，外拿进来的物品酒精喷洒消毒，至于是否点酒精灯的问题，保留个人意见。
6 k6 p: r  B+ n2 F4、操作过程中，不要混用枪头，最好自己的枪头前一天消毒，实验室人多混杂，注意保护。

wcforever126

关于接种密度问题& l" P6 E/ p5 M; c9 M
1、如果你用了细胞因子之类的，可以10的5次方/ml接种
# ^: M0 N- y( S, y, U8 n- y2、如果没加细胞因子，可以10的6次方接种。

ffkkk2007

楼主精神可嘉，我也说一个：间充质干细胞培养应当使用树脂培养瓶，比用玻璃培养瓶的效果好很多

wcforever126

回复 ffkkk2007 的帖子" o; h7 t0 @6 u2 }6 v. U$ z2 k
, Z" F/ D3 f5 V  ^1 x) g$ F
有利于贴壁，最好用进口的。

firstaider

从安全性角度出发BM-MSC我个人认为前景更好，当然必须是自体的，通过体外扩增的，目前体外扩增的技术都不怎么好，希望有人有更好的建议

lindanmiaoyao

你们都是做人的BM-MSC吗？有没有做猴子的？

细胞海洋

回复 lindanmiaoyao 的帖子
- A6 p8 H+ r6 r( j2 q! w' L* U: _9 `( w# u' \; K
建议你发新帖提问