请教一下大家都是怎么鉴定mES的

vegetax4132

最近刚拿到了几株新分出来的mES，老板让先鉴定一下。
( F1 ]$ f; E, D4 B) Y目前我想从3个方面入手：
9 _  O' a1 E7 i' v1.QPCR看下干性基因和分化基因。
7 d; o" D7 [6 x2.给克隆染下干性基因的免疫荧光。
3 w( G8 N9 n: V7 p3.悬EB做下切片染色。& h! t# }. f9 O" F
( j5 J4 |$ W' n
在这请教下各位战友都是怎么做的？ 还有在鉴定的过程中有什么需要注意的吗？

wwwsdzsgov

严格的话，RNA水平，蛋白水平，体外分化，体内分化，嵌合动物都做就行了。

wbj1983

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& M: R- a4 E! v4 i. h
4 j( F% a! L" E, Z2 x1、QPCR可以检测一下OCT4、Nanog、sox2等干性基因表达情况，相对比较简单。' a" G0 Z* ?/ y. K8 g& s
2、关于免疫荧光，可以染色OCT4、sox2、nanog、SSEA1等，也可以用western blot检测。8 S8 ?. W9 l% W1 a3 s* a& O
3、EB切片染色可以染色D-SMA: alpha smooth muscle actin; vWF: von Willebrand Factor; GFAP: glial fibrillary acidic protein; AFP: alpha-fetoprotein。
7 V# i# O+ e1 l" a8 p4、还可以在体内分化做畸胎瘤实验，然后切片染色HE。
: \; B+ J1 U/ b9 C0 Z! s- _3 k, Y0 a5、还可做2N嵌合体和四倍体补偿实验。

smallbite

能否解释一下2N嵌合体和四倍体补偿实验，谢了！

细胞海洋

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2 N# F  J% K! O6 ~, A. v5 X7 S* ?! e
% \( [$ d6 j: t; L你回复谁 就点击对方回复帖子中的回复按钮 然后输入内容 像我这样
/ j( ]; B2 X- ]; o+ w' Y
" e. Y. a* f8 _; _& f否则他会看不到

chenks

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/ A. d4 |4 M% a9 k. Z  {$ J* w1 n& {% }% g2 R3 t
鉴定包括多能性基因的RNA和蛋白水平的检测(QPCR和IF) ;核型鉴定; 多能性基因启动子的甲基化修饰;传代分析(是否能稳定自我更新); 嵌合鼠(将细胞注射到小鼠囊胚内细胞团中,再移植回母体,观察后代小鼠,最后回交,观察能否生殖传递); 四倍体互补(这个比较复杂,你可以上网搜索一下)