脐带间充质干细胞鉴定问题

米儿2003

脐带间充质干细胞流式检查，CD105不高，CD79又太高，求教！

firstaider

这应该是目前公认的标准了
' k& L: Y+ R* L$ C/ i- b4 r1、 细胞形态检测
) y. I& p8 ^5 z0 H& H/ [1 v' p  倒置显微镜下直接观察，培养瓶中的贴壁细胞为成纤维样，漩涡状生长。
& `; S3 _& B" `' S- e4 T) A2、表面标记表型分析
) l- t, M% d, T8 [  CD29、CD44、CD73、CD90和CD105阳性，阳性率不低于95％；
1 x" N% }" D" \4 [" T3 `2 g% p  CD34、CD45、CD31和HLA-DR阴性，阳性率不高于2％。
( v" i9 `5 n9 l  Y7 U3、多向分化特性：在诱导培养条件下，细胞应能向脂肪、成骨分化。

firstaider

不同来源、不同发育时期的MSC，表型是有差异的，有可能是你细胞或者培养基的问题

qiang0206

回复 firstaider 的帖子) H) c# V2 i: A- {5 ^5 A: L# G) z

2 c4 p: j6 j& L6 e7 Q: k. ?请问兔间充质干细胞鉴定能用这个标准吗？抗体必须用抗兔的CD29等，还是可以用抗人的CD29等吗？谢谢回复！

yinfuhua

这是我制备的脐带间充质干细胞。

hcoohboy

从形态看，有点偏成纤维细胞，个人觉得，你的脐带MSC可能有点分化了。你传了多少代？用什么培养体系？

pipi168

过度分化细胞，培养基的问题

askage

请发流式图，有图才好分析。
4 O- P1 A0 v6 _: N如果确定是1个峰，无亚峰，那么说明是比较均一的细胞群。如果其他指标均正常，仅这2个指标异常。请核查下你的样本制备过程、所用试剂有效期。制备过程尽量快，避光。洗涤最好3次，请用PBS。7 W% I' ~& m+ j9 e: u
对于体外培养的MSC，阴性指标，容易出现非特异性沾染，多洗几次就掉下去了，比如CD45。阳性指标是洗不下去的，顶多降低个0.1-0.2%.

likj12

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+ `. \+ H3 h% D8 o: P9 P$ b6 }9 C. W9 Y8 A; L$ Y( C
您好，想问一下，您2中他提到的这些biomarker在干细胞分化后还能看到吗？6 ~8 ]( g4 x6 c/ c$ E/ H
多谢了

uslzhang

楼主的问题是“”脐带间充质干细胞流式检查，CD105不高，CD79又太高“，属于定量了，既然是定量，那就需要对检测条件进行验证，例如抗体加入量，孵育时间，孵育温度等。