有养过RAW264.7的高手吗？

一转身的距离

如题，请教，为什么细胞冻存后复苏不贴壁？是不是RAW264.7对胰酶的作用很敏感？但是为什么在培养时又会觉得很难消化？8 [( J/ v% D5 m$ f' l) J0 @
才养这株细胞，急求解答！

一转身的距离

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3 B, I* p7 S5 x  j3 ]0 y% ^回复 katysong 的帖子
0 r" A1 e  i; e0 s- z+ V0 B8 ~# [% N& q. X% c
我们原代培养的是腹腔来源的~

myboluo

回复 katysong 的帖子4 y! S) `% C& C5 {
+ a. M6 A. z& h2 O# l  P0 z
我们也是两个小时贴壁，不过这时候还贴不牢，一吹一晃就掉了，要想贴的牢就需要7天左右

eley

强烈建议不要用胰酶消化，Raw对胰酶非常敏感，而且很容易分化。
- p7 [- s& ~* H0 Y' s+ }2 y' `7 s还有就是在用之前的培养基一定要预热。8 d: \9 [0 E* h, Q3 t. x6 r
我使用的是1640，现在细胞长得很快! d( E0 {. k4 O: ?' G/ l8 _# B
每次传代的时候，用枪把细胞吹下来就好，不要消化。

katysong

回复 一转身的距离 的帖子: R% v4 j& W& l4 u" C+ X( r

7 ^' Y9 _8 t  d+ G我们一般是用加EDTA的胰酶消化的，加酶之前用预热的PBS多洗几遍，至少两遍吧，然后加酶消化，一般3分钟以后细胞就可以变圆了（当然也要看你酶的活性，刚开启或融化的胰酶效力会好一些），可以再等一分钟，不要直接把细胞吹掉或拍掉，可以先吸掉胰酶后用PBS洗一遍，防止EDTA对细胞以后的贴壁有影响，1：2或1：3传代都可以，看你原来的细胞密度；
* _9 [( |! I2 ~% M复苏的话就只要注意快速融化，以防冰晶对细胞的影响，说难养其实还是挺好养的，要有信心，祝好运！

katysong

回复 myboluo 的帖子0 \3 z! S! ~# g8 t' M1 S5 l
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不知道你养的小鼠巨噬细胞是来源于哪里？骨髓还是腹腔？但两种巨噬细胞贴壁的话都不用太久，2小时后就开始贴壁了，当然我们一般是用过夜后再用的，不过确实增殖比较慢，除非加因子比如：M-CSF

andyz0922

我们的实验室都是 用PBS 吹打的  没有用胰酶消化的   RAW 很容易脱壁

一转身的距离

谢谢各位的建议与宝贵经验，很受启发！非常感谢！

shy8610

raw264.7相对来说，还是比较容易复苏的，要求是冻存株当时是健康优秀的，复苏的时候，尽量选用进口一次性耗材，包括管子和移液管，培养基单独配，不与其他细胞混用，PBS的要求一样，我们实验室十分介意raw细胞是否受刺激，消化情况也可以看出细胞的状态，一般来说，37度消化2分半，就可以镜下看出细胞变圆，然后可以用拍打的方式将细胞拍下，绝对比等着胰酶效果好，另外注意防污染黑胶虫

一转身的距离

回复 jimxia2011 的帖子* E# u, [, c. p# G# G, s

9 c4 ?: {+ o' |$ c5 B0 J' h没有试过用预冷PBS浸泡，因为它贴壁牢，所以没想过可以用这种方法。可以试一下。