有养过RAW264.7的高手吗？

andyz0922

我们的实验室都是 用PBS 吹打的  没有用胰酶消化的   RAW 很容易脱壁

katysong

回复 myboluo 的帖子: E4 q. K# Q3 f2 x3 u
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不知道你养的小鼠巨噬细胞是来源于哪里？骨髓还是腹腔？但两种巨噬细胞贴壁的话都不用太久，2小时后就开始贴壁了，当然我们一般是用过夜后再用的，不过确实增殖比较慢，除非加因子比如：M-CSF

katysong

回复 一转身的距离 的帖子6 [* F3 ^8 o+ p% n: c& g7 s
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我们一般是用加EDTA的胰酶消化的，加酶之前用预热的PBS多洗几遍，至少两遍吧，然后加酶消化，一般3分钟以后细胞就可以变圆了（当然也要看你酶的活性，刚开启或融化的胰酶效力会好一些），可以再等一分钟，不要直接把细胞吹掉或拍掉，可以先吸掉胰酶后用PBS洗一遍，防止EDTA对细胞以后的贴壁有影响，1：2或1：3传代都可以，看你原来的细胞密度；( r6 E# S, y9 r+ N1 s$ J, e2 O
复苏的话就只要注意快速融化，以防冰晶对细胞的影响，说难养其实还是挺好养的，要有信心，祝好运！

eley

强烈建议不要用胰酶消化，Raw对胰酶非常敏感，而且很容易分化。6 z. p. r; y2 T2 o" _3 E% q
还有就是在用之前的培养基一定要预热。/ O7 E3 Z3 y; `
我使用的是1640，现在细胞长得很快) S( w% }( a9 w3 u8 [
每次传代的时候，用枪把细胞吹下来就好，不要消化。

myboluo

回复 katysong 的帖子0 Q& r) R1 v9 ?

" M3 B% ?% J4 q  b  ^我们也是两个小时贴壁，不过这时候还贴不牢，一吹一晃就掉了，要想贴的牢就需要7天左右

一转身的距离

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; g' @" }) o  @+ z  I; [9 R: ?/ W9 k回复 katysong 的帖子
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3 |# E  R# C: U我们原代培养的是腹腔来源的~