大家都是怎么消化mES的

不倒翁

最近养mES R1，看了很多protocol，都强调传代的时候一定要制备成单细胞悬液，要不然很容易分化。 我消化的时候0.05%的胰酶消化3min，一拍盘细胞全都掉下来了，然后加2倍体积的培养基终止，发现细胞吹不散，种下去还是成块的。有没有有经验的人指点一下，消化多长时间，加多少体积的培养基重悬，吹散的时候大概吹打多少下？先行谢过了~

iseeyou1210

不要忘记在胰酶里面加EDTA哦！

不倒翁

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: H4 w$ h# Z( r, B& s; Y
嘿嘿 谢谢

BNJN

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# G; B+ t4 v( p5 [1 F+ l% _' J) |7 y& O5 N5 `3 e( D
0.05%,打错了

lchoxy

我也遇到这种情况，有几个原因吧，一是FEEDER状态不好，或者增殖很旺盛，消化的时候就容易把细胞成片消化下来，而且很不好吹散。另外就是酶，还有消化时间1 t# u( ?; k* `- g" U4 n7 w' \* z8 G

不倒翁

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+ }$ p& D6 t) S9 H0.05还是0.5哦
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BNJN

我用的是0.5%的，同时含有EDTA

不倒翁

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8 u- M1 b3 N, f7 L( h. K嗯 谢谢提醒 我先换新的试一下

不倒翁

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1 W! [- l2 h7 ?
那我换胰酶试一下 你们用多大浓度的胰酶 消化几分钟

BNJN

可能是胰酶问题，我实验室也有放久的胰酶消化力下降的问题。可以把一瓶分装，不用的放-20，每次取一瓶出来，用前要混匀。