大家都是怎么消化mES的

不倒翁

最近养mES R1，看了很多protocol，都强调传代的时候一定要制备成单细胞悬液，要不然很容易分化。 我消化的时候0.05%的胰酶消化3min，一拍盘细胞全都掉下来了，然后加2倍体积的培养基终止，发现细胞吹不散，种下去还是成块的。有没有有经验的人指点一下，消化多长时间，加多少体积的培养基重悬，吹散的时候大概吹打多少下？先行谢过了~

sciencesky1

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$ z& m% d6 u% l$ w你是把ES养在MEF上吗，还是直接用培养基加Lif养的？我在养TS，细胞也吹不散，跟楼主一样，期望有高手解答！

igdb

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放在37度里再消化一会，大约3-5分钟。。 不过我都是用0.25的胰酶

不倒翁

回复 sciencesky1 的帖子# k, j$ _: R8 p3 E6 H6 u9 k6 J7 F
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我养在feeder上的

不倒翁

回复 sciencesky1 的帖子! `: F, _, @( ?- }$ E, k* k
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培养基是加lif的

不倒翁

回复 igdb 的帖子2 p+ t' G: b. C! L$ u
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就是在37°消化的 那我换胰酶试试

iseeyou1210

0.25% 的trypsin，消化5min，然后1100rpm centrifuge， 3min， 去上清，加入适量的ES medium，吹打5次左右，一般都能形成单细胞。

生旦净末丑

有可能是你的胰酶效果不好了，我们之前也出现过这种情况，消化几分钟后细胞能全吹下来，但是不能吹散成单个细胞，后来使用新鲜的胰酶消化两分钟吹两下就好了，你可以试一下

BNJN

可能是胰酶问题，我实验室也有放久的胰酶消化力下降的问题。可以把一瓶分装，不用的放-20，每次取一瓶出来，用前要混匀。

不倒翁

回复 生旦净末丑 的帖子" W1 s- j: G6 `* _8 W7 B- p! f$ [

7 r; {$ Z8 T4 ]" ?4 C0 H8 q那我换胰酶试一下 你们用多大浓度的胰酶 消化几分钟