关于慢病毒转染人脐带间充质干细胞的问题。polybrene、MOI值

quge_00

最近在做慢病毒转染脐带间充质。有做过的，请教一下。& d* Y* H6 }  H5 Z$ f0 [$ [6 s7 Z
1、包装细胞接种第二天融合达50%，文献有报道到70%再转染，50%效率是不是高些呢？
: m/ a# y( Z8 l( ^  `) k2、为什么要用无双抗的培养液配制病毒液呢？
; S% \0 }6 O3 e" T+ C. k3、转染前用293细胞测滴度不？4 g) r; W8 v; i6 Z& X* I
4、文献报道MSC使用慢病毒转染MOI值比较高（10），并且同时还加入了polybrene（8ug/ml），请问您操作时加吗？还是自己梯度摸索呢？
0 R' \7 t- K: u' v+ n( Y
2 L  U- S% k6 v6 a+ P; P+ ?- Q/ c8 H* g4 f
问题很多，见谅啊~~很是头疼，因为做了一次，没有明显的转染阳性的。。。。

quge_00

回复 chentian820 的帖子, E9 X% S- N5 V

% ~  L1 \/ o  I$ U; A0 \1 L8 ?学习了啊~~

quge_00

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4 i. J9 P" V+ p- h' z6 U& X- `$ w9 N/ I  m" W
多谢解惑啊~~~

chentian820

就我最近的经验分开解答。
: R5 F3 w  u. y( P. K1 293细胞密度在50-80%均可进行包装。包装效率最关键的还是包装细胞的种类和转染试剂，如果你的包装细胞用钙转不理想，建议你直接用lipo2000转；
& s; |7 A: {6 i4 r+ E2 我的培养基里面是加正常抗生素的1%。有的时候也不加抗生素。其实抗生素影响的主要是你的转染效率，而不是直接影响病毒的活性。
! L4 g& X$ M4 p9 g) H( m6 Q3 不用测滴度。测的滴度也是相对滴度。仅作为参考。$ n, Z0 P/ \( K. t( m
4 我使用的polybrene浓度是10， 感染后12h换液。

jhu132llh

1.50%和70%效率上差不多，到那时50%的更方便一些，因为慢病毒表达比较慢，一般是转染后2-3天才筛选的，所以50%的要好一点的；
8 E" [4 s8 |9 D. \2 H# k2.理论上，培养液含不含双抗和相应的生长因子对病毒是没有影响的；有的时候，慢病毒转染还是使用完全培养基的；
; w5 A) Y' r" F0 w: t0 G3.一般在纯化慢病毒的时候就已经检测滴度了，所以一般是不用重新测滴度的，除非病毒在-80度冻存超过8个月，一旦冻存超过8个月，最好是重新做个滴度；( e+ h( i# X& e) B
4.可以做个梯度MOI，所有人的MSCs都会有点差异的，所以条件不能完全通用，所以最好是做个MOI梯度摸索一下最佳条件；
& N9 f$ {2 N; k" I' c8 R' [5.polybrene是一种带正电的小分子，可以有效中和细胞表面携带的负电荷，有效提高转染效率至10倍左右，可以试一下不加和加，然后加8ug/ml和6ug/ml两个条件；