关于慢病毒转染人脐带间充质干细胞的问题。polybrene、MOI值

quge_00

最近在做慢病毒转染脐带间充质。有做过的，请教一下。* t  }4 f) p% f' q+ }
1、包装细胞接种第二天融合达50%，文献有报道到70%再转染，50%效率是不是高些呢？8 I$ L  K$ E" h* _5 _) M
2、为什么要用无双抗的培养液配制病毒液呢？6 T: k7 L, n  A( }4 U
3、转染前用293细胞测滴度不？* @7 z% C4 c- N! ?4 L
4、文献报道MSC使用慢病毒转染MOI值比较高（10），并且同时还加入了polybrene（8ug/ml），请问您操作时加吗？还是自己梯度摸索呢？
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' X. e8 T. h0 q问题很多，见谅啊~~很是头疼，因为做了一次，没有明显的转染阳性的。。。。

jhu132llh

1.50%和70%效率上差不多，到那时50%的更方便一些，因为慢病毒表达比较慢，一般是转染后2-3天才筛选的，所以50%的要好一点的；
1 ~$ g  r5 x& \8 M: G( c! W2.理论上，培养液含不含双抗和相应的生长因子对病毒是没有影响的；有的时候，慢病毒转染还是使用完全培养基的；0 P: j0 l# C2 h) n' Z9 A
3.一般在纯化慢病毒的时候就已经检测滴度了，所以一般是不用重新测滴度的，除非病毒在-80度冻存超过8个月，一旦冻存超过8个月，最好是重新做个滴度；
7 z, N( \- _- V! [* `$ p3 T8 }4.可以做个梯度MOI，所有人的MSCs都会有点差异的，所以条件不能完全通用，所以最好是做个MOI梯度摸索一下最佳条件；$ @  }& g" i8 M4 ]3 ]6 e: r: b4 g
5.polybrene是一种带正电的小分子，可以有效中和细胞表面携带的负电荷，有效提高转染效率至10倍左右，可以试一下不加和加，然后加8ug/ml和6ug/ml两个条件；

chentian820

就我最近的经验分开解答。7 n5 S) C4 }0 q: ]- k3 r3 u
1 293细胞密度在50-80%均可进行包装。包装效率最关键的还是包装细胞的种类和转染试剂，如果你的包装细胞用钙转不理想，建议你直接用lipo2000转；8 R6 W/ K5 ~; ]5 A* J
2 我的培养基里面是加正常抗生素的1%。有的时候也不加抗生素。其实抗生素影响的主要是你的转染效率，而不是直接影响病毒的活性。# l/ A) [) ^$ K9 d5 x- P
3 不用测滴度。测的滴度也是相对滴度。仅作为参考。( {% D( `& d/ N1 L0 z% @
4 我使用的polybrene浓度是10， 感染后12h换液。

quge_00

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8 R" I3 o1 a% M: J) h多谢解惑啊~~~

quge_00

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学习了啊~~