怎么将出生后0-3天雌性小鼠的生殖细胞和颗粒细胞分开？

chenchunlei

贴壁？最好能有实验操作步骤

aulenuyah

你这是要分离卵母细胞吗？老鼠太小了呀

chenchunlei

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6 e% a0 R5 _# X+ S+ p, E
要颗粒细胞

aulenuyah

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  A5 r+ a2 e( Y  y* C& Y
什么样的颗粒细胞？就是腔前卵泡上面的颗粒细胞吗

chenchunlei

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) J/ L# H0 p2 n. E" t就是将0-3d卵巢消化后怎样获得颗粒细胞+ v! @6 F) J; }4 q& |

aulenuyah

回复 chenchunlei 的帖子' a& w9 X/ \5 p
8 S+ n/ G8 l* a% b  t
我以前取过成年小鼠的。建议你不要直接消化。先在显微镜下将卵巢用异物针撕碎，然后用0.1%胶原酶吹打消化，之后再显微镜下将腔前卵泡检出，然后单独消化腔前卵泡，这样得到的颗粒细胞会比较纯净。因为你要做的是幼鼠，尚无有腔卵泡的发育，只能取腔前卵泡，而且不管怎么样，细胞都不会很多，如果细胞需要量大的话，就只能多杀老鼠了。。。

chenchunlei

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, E* \$ {2 m0 k& W$ j/ M9 X
谢谢" w0 C: g, A- L, S9 r( Z
之前用了四个卵巢一消化离心后几乎没有颗粒细胞了

aulenuyah

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如果这样的话，试试看不离心

chenchunlei

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+ b1 u' e9 A8 I" D# U
6 L* T# b$ e" Q1 X那岂不会有TE在培养液里
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aulenuyah

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8 H4 M4 o9 z: ~' j% E. f/ Y7 K  {: t4 ]7 \2 C% d- q; T9 X! T" A
怪不得你弄不出来呢，一般消化颗粒细胞需要用透明质酸酶消化的，如果没有透明质酸酶也可以用胶原酶（0.1%浓度）代替。胰酶的作用太强烈了，颗粒细胞很脆弱，而且还那么少，受不了胰酶的。