请问我养的msc细胞为什么中间这么多空泡？

fancheng167

+ F3 G" C1 o; P0 Z
4 |& k+ A8 `2 q# S9 A新手，刚刚把实验室里前辈养的msc拿来复苏，然后传了几代，是来源于24M的小鼠的whole bone marrow，请大家帮忙看看为什么我从P4 传到P11，现在的P11形态不好而且细胞中间很多空泡，其实传到P8的时候形态就开始不好了，想知道是我养的问题，还是复苏的细胞本身的问题？再就是可以明显看到其他的细胞，那些是什么细胞？

vanessa

细胞传的太稀和细胞开始衰老会有这样的现象的

dongxin

应该是细胞密度过低，

辛西雅

细胞传代次数太多，吹打时细胞没有完全分散，聚集成片的细胞可能会出现分化现象，也可能是复苏的细胞在冻存之前就已经传代培养太多次数，导致细胞活性不太好

wujh1986

小鼠MSC最好是五六代前就用于实验，鼠的MSC很容易分化的。

fancheng167

谢谢大家的回复，我现在有以下疑问：
) k8 Y! F6 {) }7 B1.我实验室的前辈说他们用状态好的msc可以传40多代都没有问题，所以我现在很疑惑到底msc可以传多少代？什么时候说明细胞老化了？% a4 E0 b* o6 P
2.确实养的时候我也发现传的密度很重要了，一开始我都是1传4，后来有次长的太快了，我就变成了1传8，甚至1传10，现在想知道如何判断传的密度，到底1传几比较合适？
$ _/ I  W9 r3 P  W. M3.不管传几代，中间都看到杂细胞了，很想高人指点一下我，图中的杂细胞到底是何种细胞？如果我再做一遍纯化会有好处吗？

ditiger

有空泡，核仁变大，是细胞老化的早期表现吧

qilan2012

转自丁香园，希望对你有帮助，我们也经常出现这种情况，找到什么原因希望告诉我一声
) _" J( F* ]. }- o! U/ M/ O1) 不排除轻度污染的可能,重度污染会伴有培养液的浑浊.8 I7 K: |0 X- f. W, P% `) P/ Y
2) 培养液的PH值与细胞正常所需PH值差别太大.
: s. Q2 E1 u% U' @3) 还有一个大家易忽略的问题,我从香港一家研机所的资料中查到如果消化细胞吹打时力度过大,产生太多气泡,长期存在也会出现这种现象. 原资料: . T3 [9 `4 `4 |( y
有條紋出現:  局部濃度過高, D3 F3 L' C1 D- d# q% T. F  }
細胞剝落:  細胞接種太多,或培養時間過長+ L8 @( `2 Z+ H# u2 [
Roller Bottle中有環狀物出現:  振盪擴散轉子速度太快
6 P6 W2 v! X# k( O+ l" Q2 C% ^Roller Bottle僅有單邊有環狀物出現:  振盪擴散轉子速度太慢
# v: B' o& |8 U泡质有空洞:   培養基氣泡太多9 M, @2 I0 a- p  M
細胞成黏稠狀:  trypsin(胰蛋白?)處理過久

jennyshizz

这个状态看上去细胞是老化了，我们的MSC一般是传10代左右的是比较适合做相关的研究的，传太多代了容易出现细胞老化及分化的现象；全骨髓贴壁法来分离BMSCs主要是靠传代来进行细胞纯化，所以胰酶的浓度及消化时间非常重要，控制好消化时间及胰酶浓度才能使所需要的BMSCs消化下来而巨噬细胞、单核细胞等一些杂细胞仍然贴壁而达到纯化的目的，我们传代的时候是以1:2的比例进行传代的，胰酶的使用浓度是0.25%；另外，培养过程中，培养条件对细胞的生长也是至关重要的啦，比如血清的浓度及质量，血清的成分比较复杂，使用之前应该做一些克隆形成率的检测方能投入使用，不然很容易导致所培养的细胞状态不佳的

细胞海洋

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( t) n! t( C# E" e2 C! Y
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  j5 l( N9 w5 Q8 p$ x! f
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