现在胰酶消化细胞效果很差，求大侠指导

dc1818

我现在用0.25%的胰酶3ml消化T25的瓶，四分钟的消化效果都不好，吹打也没多大用，不知道哪位大侠有更好的办法吗？

sdwzg119

胰酶放了多久了？突然出现的情况吗？一般胰酶4℃不能放太久的~
( S* A5 i% t7 R4 [9 Y
: Q' w( N- j! z; `1 Q还有，你培养基洗干净没？没洗干净也消化不动。

dc1818

回复 sdwzg119 的帖子6 t6 l# z) P% H( ]& W

0 V; f4 i% N0 r胰酶应该在一月之内，培养基就是用移液管吸干净了，没有用生理盐水冲洗

634996425

回复 dc1818 的帖子4 o8 I: {5 e. O, n! A
6 O) u8 h4 ~8 e7 P
我建议您配制TE溶液：0.25%胰酶+0.02%EDTA，不要放到37℃，直接放到室温45min左右即可，操作过程中记得把我好消化时间，胰酶如果每次都预温用不了下次再用一热一冷酶活性会降低的，希望对你有帮助

dc1818

回复 634996425 的帖子
7 h$ z. u+ u8 C+ f1 \7 M8 _
. H8 ?) ?* g6 y) |8 l5 R3 r多谢指教，我用你的方法试试看

bsx1111

我建议你用生理盐水冲洗一次到两次，洗去培养基中的血清，在用胰酶消化

细胞-77

胰酶还有活性吗、还有，你培养基洗干净没？

sdwzg119

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6 n# C/ U/ f! q1 v4 p& l) ?6 y3 K* R1 S
一定要洗至少两次再消化的，你下次洗完以后再消化，估计就没问题了，养细胞不能省事的~

jensn

首先，必须有PBS或者HBSS缓冲液彻底的清洗培养瓶中残余的旧培养基，不然以为加下去都被中和了。再者，加入胰酶之后，需要放在37度培养箱中孵育个一两分钟，跟胰酶的最适温度有关。另外，有些细胞本身的特性问题，在我们实验室就发现，同样是培养原代骨髓间充质干细胞，C57老鼠就比BALB/C的要好消化，人脐带的间充质干细胞就更好消化。这个原因我想可能跟不同种属的实验动物，其原代细胞的均一性有关。

dc1818

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1 a  e, L$ v! z+ y  J3 p9 a" u放培养箱消化挺有意思的，下次试试