脐带间充质干细胞形态求分析

huajie881026

养了几次脐带MSCs，细胞总是老化很快，前些日子也在版内发帖求助了一番，有大侠跟我说他一条脐带最多能传40代，这对我目前的状态来说简直是不可想象，所以想改进细胞培养方面的技术。在此麻烦大家伙指点一二！
3 ?% c8 O3 ]4 H3 u9 M' y* M想请问：我用的是DMEM-LG+10%FBS+1%双抗，一定需要加bFGF吗？
# r' s) g; z) U- O# L$ A% U胰酶现在的消化时间控制的还可以，昨天看到有文献说用0.05%胰酶消化1-2min的，我又一次怀疑自己的胰酶是不是加多了。我一般0.25%胰酶+EDTA在T25培养瓶里加500-800ul，之前PBS洗了之后培养瓶里留0.5ml左右，相当于等比稀释胰酶，这样消化约1min，然后终止消化。
) J5 P7 }1 i! q4 {+ p1 H. y$ W: M1 |我想找出更多影响细胞状态的原因，求指点！8 O" @2 Y+ o& D7 f, P: E7 }' O
下面是我养的图片: C% j( n, Y4 S! X5 R) q' z4 ?2 X' A
P0
% I1 n- a* Y* R$ z8 w' j( Z# x( P( o9 E& Z' Z% k
P1
# A- O+ n2 y. t# w; ^
+ B0 V# v. J6 N3 r! _P2+ i  _; Q+ u0 z, [7 V* W; J

gghywtfz

我觉得最大可能是因为你使用的血清并非筛选过的血清。% H$ Y& k% Q% O
另外，可以在培养基里加进去2mM L-glutamin) [5 k: |7 ]( G, d6 Q
一般MSC对L-glutamin比较敏感。% S3 i2 i3 ]. c- k" C$ n/ o2 e6 Q- B; _

$ ]5 e2 |2 L6 ^5 a! p

willing

我养脂肪间质干细胞有同样的困扰。。。。求解答。。。

ind6562

如果你想让细胞活力更好，最好加加bFGF。
  `0 f: t! z  Q% Q5 b; e把种瓶密度调点，间充质细胞要保证细胞间的接触活力才会好。当然原代细胞不好调整密度，但你可以早点传代，不一定要等它们长到80%的汇合度，你这一等，细胞可能就老了。

ind6562

不好意思，是种瓶密度调高点

SKC-SFC

从你的细胞图片来看，并没有多老，属于正常情况

huajie881026

回复 ind6562 的帖子$ C' h0 b& g% m

/ F* n& ]8 g4 X5 f' i& p我一般是5000-10000cells/cm2，5天左右可以传一代。+ D2 K; Z9 ~7 v' J
bFGF是重组人bFGF吗？

huajie881026

回复 gghywtfz 的帖子
1 i+ o) R! t, h- T( I
/ J/ B1 @  W* u我用的是GlutaMAX，长效的
7 Y+ g! C0 ^! W* v) t1 {血清的话的确是没有筛选过的血清，请问哪个公司有适于这个细胞生长的血清呢？

流泪的鱼

你中和的方法考虑到了吗？这步是细节，也很重要。我以前曾经犯过小错误，导致传代后的细胞长势不好，好好注意实验的每一步骤。

ind6562

回复 huajie881026 的帖子
, e& F3 P( E. E& o( Z5 [" Q; k* U% h  ^* {- @) C
我们一般种的密度是500000CELL/T25培养瓶，这样算下来是20000cells/cm2，你的密度我认为是偏小了。
: D8 j: b* K1 u% j! u3 k7 R, ^我没用过bFGF，有同学用的说是重组人bFGF，但你买之前应该自己先了解下。