小鼠IpS传代

2006sw0657

P1代的小鼠IPS细胞用机械法传代还是酶消化法传代 ？ 文献上更多的介绍酶消化法 是不是当克隆较多时选择酶消化法 而克隆较少时选择机械法传代？ 请高人指点

小禾禾

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3 s# b4 a# Z# G, ~" N7 z你所说的p1是指的哪一代？是刚刚诱导你就算第一代，还是已经传过代了？
: B' ?# g: n6 N8 e

2006sw0657

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. N3 l. g- R/ R* [% x/ f1 `' u4 M2 J) {- r) m3 S3 X
你好  是已经机械法挑取传代的的P1代克隆   还请指教

小禾禾

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) c7 j# k& q: P, b$ R! R) M1 n
- U3 F, F4 j! S1 l) y) m. {9 {/ y那要根据克隆状态和克隆数量。如果细胞状态不是很好那还是机械的比较好。细胞数量较少的话最好也采取机械的方法，因为酶消化对细胞损伤还是挺大的。

2006sw0657

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/ ?8 R* V% ?4 Z5 ~+ q
0 ]" n0 F9 s- y- a首先非常感谢你 另外 想  请教你  酶消化时 会把基质细胞消化下来吗？  具体消化过程能告诉我一下 好吗？  非常感谢

小禾禾

回复 2006sw0657 的帖子* L, T, u9 A$ |2 E  }* g% k" C8 ~

3 V. s! ^/ v% w  T$ K消化肯定会把基质消化下来，但没关系，他基本没有存活的能力。很简单就是加酶消化2-3min，然后用培养液终止，吹打，收集，离心，接种。
9 S0 @& Y. D! b6 f' y

2006sw0657

回复 小禾禾 的帖子" a' \- D( ?" r, O2 V" R
, s9 m' S3 [2 y, I% r
嗯 好的 谢谢你 我先试着传代  有什么问题再向你请教  最后   感 谢

小禾禾

回复 2006sw0657 的帖子$ b4 |5 C  D% Z1 S9 G0 p. q

' G+ G5 B3 P* I( Z+ }不客气，相互学习嘛

Jonathan

鼠的ips，一般克隆挑出来后，可以用酶消化，然后passage。如果克隆少，就在24well或者12well的一个well里面就可以

2006sw0657

回复 小禾禾 的帖子6 Q( O; ^* F/ I$ G$ E- ?" C

8 |4 N* h& t7 a+ q 你好  我的小鼠iPS细胞 在24孔板里面  克隆长到70-80%贴壁  传代至6孔板时  最好按多少比例传代？   我最近把 一个孔 分到 六孔板 的 两个孔 里面  发现细胞长得很慢  大部分克隆界限不明显  是用胰酶消化分化缘故  还是传代太密了？