小鼠IpS传代

2006sw0657

P1代的小鼠IPS细胞用机械法传代还是酶消化法传代 ？ 文献上更多的介绍酶消化法 是不是当克隆较多时选择酶消化法 而克隆较少时选择机械法传代？ 请高人指点

小禾禾

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% L' s7 B/ j. }2 q: b2 c% Z你所说的p1是指的哪一代？是刚刚诱导你就算第一代，还是已经传过代了？
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2006sw0657

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1 |; P! x+ J3 U8 N' ^7 L4 y
$ e* Q! |, q9 ?9 r, R$ }你好  是已经机械法挑取传代的的P1代克隆   还请指教

小禾禾

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+ U/ ?9 L/ D, _' U
那要根据克隆状态和克隆数量。如果细胞状态不是很好那还是机械的比较好。细胞数量较少的话最好也采取机械的方法，因为酶消化对细胞损伤还是挺大的。

2006sw0657

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  P- D/ t7 ]% }4 L& T5 h; ]4 J. X
首先非常感谢你 另外 想  请教你  酶消化时 会把基质细胞消化下来吗？  具体消化过程能告诉我一下 好吗？  非常感谢

小禾禾

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5 M% E" {$ }- g) B3 ?
* }  r- t8 F( y% p, a消化肯定会把基质消化下来，但没关系，他基本没有存活的能力。很简单就是加酶消化2-3min，然后用培养液终止，吹打，收集，离心，接种。3 C: w6 Z, ~9 ~% u$ x, o+ V0 K

2006sw0657

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9 N+ R9 ^$ ]* A) C) }9 a$ c. v2 H' o5 n6 v( K; C7 N$ \
嗯 好的 谢谢你 我先试着传代  有什么问题再向你请教  最后   感 谢

小禾禾

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  U7 x6 v/ O7 ?7 x7 M& d7 I& s不客气，相互学习嘛

Jonathan

鼠的ips，一般克隆挑出来后，可以用酶消化，然后passage。如果克隆少，就在24well或者12well的一个well里面就可以

2006sw0657

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你好  我的小鼠iPS细胞 在24孔板里面  克隆长到70-80%贴壁  传代至6孔板时  最好按多少比例传代？   我最近把 一个孔 分到 六孔板 的 两个孔 里面  发现细胞长得很慢  大部分克隆界限不明显  是用胰酶消化分化缘故  还是传代太密了？