请教，为什么我用碱裂解法大提的质粒电泳只有两条带？

yuhaoze

今天用碱裂解法大提的质粒，跑电泳出来了两条带，想问一下，正常情况下不是三条带吗？0 K) p& F6 T5 ^# v! I+ n
在就是A260/A280=2.3,会影响转染效率吗？

vividvivid1225

回复 碧落 的帖子; k6 t. M" W% F! U% U! ~# p
, B2 Q( L0 v; ]+ K6 A4 P: [
大肠杆菌的基因组是线性的，碱裂解法用到NaOH。碱性条件下线状DNA发生变性，质粒DNA维持环状。在高盐条件下作复性处理时变性的DNA会形成沉淀，从而将质粒DNA和染色体DNA分开。所以碱裂解法是提不出线性DNA的。

袁小懒

一般都是一条带，但有时候两条带也是很正常的，因为是质粒嘛，有正常环装还会有超螺旋等不同形态，而因为它们的形态不同，在电泳过程中跑的速度不同纠纷出两条带了:)

碧落

回复 vividvivid1225 的帖子& Y- U1 b' r7 D4 J" ?5 I

! s) Q/ I1 p, t应该有一条是大肠杆菌的自身的DNA吧

碧落

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& ^. h( j4 N8 w+ \应该有一条是大肠杆菌的自身的DNA吧

vividvivid1225

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# P5 C7 j- P& s
. W' d, C" i0 K( H5 `9 T) P" E/ N3 c好的情况为啥2条或者3条呢？最好的情况不应该是只有一条带，超螺旋吗？

pipi168

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) `' e5 [! v* [: H& d5 u, k$ q2 l" Z1 a+ g$ D
要签订以下的

huangcong1988

两条带，也没问题，你要做个酶切鉴定，而且还要测序，鉴定正确了，就没问题，可以用

yuhaoze

回复 pipi168 的帖子- A6 l5 [7 @, y( i; }

+ W, N0 F2 [1 O$ G( x& |) r我想问问您这两条带分别是什么，因为酶切之后只剩一条了

pipi168

一般就是2条带