关于干细胞染色体核型分析的一些问题

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近期在干细胞染色体核型分析前，在制备染色体的时候遇到以下情况：
2 W0 r4 d7 X  j) a/ q8 O3 q# U1 .不知道怎么选取细胞，过早则看不到任何染色体形成，太迟形态也不对+ _, F) A9 l( G2 E# o; ?
2 .最大的问题在于低渗处理的时候，没有办法破膜。
/ g: T. |/ ~2 m' k. {1 j3 L求助：1.如果选择用于制备染色体的细胞% G" S, u: c9 I8 p
           2细胞低渗处理方法如何优化？
% k- r  H8 {  S# _! u$ b谢谢各位i！

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突击兵之小土豆

1、用秋水仙素4 I/ Z" m  v5 L4 B. I; [( ]
2、自己配低渗液，KCL好像是

xbs530515

选择的细胞，必须在对数生长期，这个就要根据你的细胞本身的特性，以及接种的密度都有关系了。你可以考虑一下取24h，和48h的比较一下，一般细胞都是这之间。实在不行的话，估计就要做个生长曲线来确定一下你的细胞的对数期。
3 ^+ Q7 o0 Z+ f( n9 m+ U1 a+ h我认为你第二个问题也是因为没有选到对数生长期的细胞造成的，一般的话，低渗还是比较容易。你做个梯度，20min，30min，40min试试看，一般也就是30min就行的，所以，还是应该摸索一下你的细胞的对数生长期才是最关键的。

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* z7 s. t9 s9 U. f. J嗯，说得有道理，第一次有40%的细胞是可以看到分散的染色体，形态也很典型，固定和染色都不错。但第二次的实验结果失败，选取的细胞是36小时的细胞，低渗和固定后看到的细胞里看不到染色体的存在，低渗的话应该只是胀大，并不需要细胞膜破掉，我用的是KCl0.075M，作用时间为30min，秋水仙素的使用浓度为终浓度0.45ug/mL。

突击兵之小土豆

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4 @3 Y% R; Y% `5 c  t) `9 J
     能看到分散的染色体，关键是滴片，注意利用热胀冷缩，具体方法不透露了。只要掌握好距离滴片，一般很容易的。

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! s$ R2 u5 x1 Q/ f2 r
嗯，说得很对，不过距离太高貌似滴不准

突击兵之小土豆

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7cm左右吧，一手拿吸管瞄准，一手拿冷的载玻片（注意要有雾气，没有立马不要），瞄准，然后快速滴，不管滴的怎样，快速滴20个板，最后画圈，用松脂封片（我个人比较喜欢松脂，本来还想手工做个琥珀呢）。熟能生巧，多练就越来越准的。加油啊
: V. c( l/ ?& k  K1 S8 S& L# V, I+ R5 v# U; N% \
这个方法是老师傅的方法，不外传的，我说了。一定要给我很多威望和包包啊，要不对不起我啊！！

突击兵之小土豆

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# X% K' n' k0 N; ^' u2 p( @# B1 B6 c8 b5 c( V7 s" d# U' [
70CM   打错了   

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& `6 z, ~; t+ g' C$ z' C4 n( C: b' W8 X( T6 k# _8 C1 Y
70CM 要滴准，那技术得多精湛呢，而且滴片还是应该先滴一片，看看大致的细胞密度吧