关于干细胞染色体核型分析的一些问题

SKC-SFC

近期在干细胞染色体核型分析前，在制备染色体的时候遇到以下情况：
5 ~- K, {' A! w6 f1 .不知道怎么选取细胞，过早则看不到任何染色体形成，太迟形态也不对4 [) z( t/ p2 v* t& _
2 .最大的问题在于低渗处理的时候，没有办法破膜。: h" W& b5 z8 O8 `+ M
求助：1.如果选择用于制备染色体的细胞
2 u, T3 h8 H1 }. w+ p/ S4 L           2细胞低渗处理方法如何优化？
5 _8 o( Y. Z' B$ u4 N谢谢各位i！

cartoonyang

Briefly, actively proliferating cells were incubated with colchicines (0.1 lg/ml) for 4 h at 37 _C. The cells were washed twice with DPBS, trypsinized, suspended in a chilled hypotonic solution (68 mM KCl) and incubated for 20 min at 37 _C and then fixed for 10min in chilledfixative (methanol and glacial acetic acid, 3:1). The pellets were suspended in 5 ml of chilled fixative for another 10min. The metaphase spreads were prepared by dropping the cell suspension onto ice cold glass slides.
$ n% ^1 q3 g9 B+ ~5 \, K0 Q# l1 R) [# i" Z8 b
网上找的，我准备用这个方法试试。供分享！

cartoonyang

8 h8 \' R  i7 O% c1 Z/ J# i" Y. i" L/ ^9 ~) p5 c' k5 }1 c4 y
很好的帖子。
2 d0 c) R7 J* j5 [4 A. g* [1 c. p6 C我之前做了很多体细胞的核型分析，分散效果一直不好。我在想，可能当初我没用预冷的载玻片有很大关系。
( _; A5 n0 T4 A9 l+ I0 B2 C谢谢分享！！！

184lj

只做过体细胞的核型分析，取对数生长期的细胞，终浓度0.4ug/mL秋水仙素处理2~3h；KCl低渗液处理；3:1甲醇病乙酸固定液固定细胞；调整浓度 滴到-20℃冷冻的载玻片上（高度50公分就差不多了）。

突击兵之小土豆

回复 labghost 的帖子- y: G* v- u7 ?# ]" z
7 F, ?! X, ^7 s/ z2 C
氯化钙 我们倒是没加过   很多东西没大家想象的那么难  我记得我们小时候玩弹球  就用弹球拿起来 点射别的弹球   个人表示无压力  小时候玩弹球很准的 哈哈

labghost

将近一米的告诉滴下去，把一滴液体滴在一个载玻片上，7101,7102都在10cm²左右，能那么准，这技术真不是一天两天三四五六七天练出来的哈。

labghost

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. a. H- R/ l; T9 F8 k% i
4 Q9 [; q9 @7 a/ m- k* A" [要是再有点氯化钙就更好了。

突击兵之小土豆

回复 SKC-SFC 的帖子1 t3 G" u: J  C7 ^$ k' n, D6 b

2 N# Q0 M9 {" }6 B& j+ p/ K利用热涨冷缩原理，载玻片事先放盒子里，在滴片前都是放在冰箱里，你滴完片，是要先封片的 ，观察一下，好的留下，不好的丢弃。即使你用软件进行核型分析，也会在处理数据时删除一些细胞图片的，不是每个图片都利于核型分析的。

SKC-SFC

回复 突击兵之小土豆 的帖子' ~% o4 N) L$ e3 h# x  {: n
9 e* f7 j' W2 u$ j& g6 U7 `
70CM 要滴准，那技术得多精湛呢，而且滴片还是应该先滴一片，看看大致的细胞密度吧

突击兵之小土豆

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) ?# g9 \' P' g, t- P! ?" |: I3 r: e: c
70CM   打错了