第一次分MEF，感觉细胞好杂啊

jun8013

没有过筛，剪完消化后直接装T75培养，很多组织块还贴在瓶壁上，还有细胞好杂啊，细胞形态也不均一，我三个胚胎一个瓶，长得真快，过夜就的消化了，不知道怎么处理，尤其怎么去除那些组织块。
( @: p8 r+ F2 m8 Q9 y还有大侠们帮看看分得细胞。" m( F0 K" _* b. z

labghost

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7 I" J) E5 V8 T- x  w
6 m+ |; f% W( U, @1 f- ~不是，感觉是培养皿是脏的还是怎么的，觉得你这成纤维细胞状态不对啊。

南宫燚岚

% m- R  A) B! X2 Y8 I% O
8 }% I* {- m. u  _6 t! e消化下来的细胞完全够用了，所以瓶底那些没掉下来的扔掉就可以了。
  U1 @6 u/ _- D) @另外，不要让MEF长得太满，100%已经是上限了，只要90%以上就能传代，如果你发现MEF长得很快的话，那在传代时可以采取1:3以上的比例，然后舍弃一部分呗。
- T+ ~- ?% }4 }* D8 W7 t  c这是我分MEF时的图片：（不知为什么你们的都是紫色的？是CCD的关系么？）
4 Z% C5 U: T% w  K/ U% B
7 q: y* T$ o) v1 u3 G分完第一天，因为是体视镜分离，去头尾四肢，所以细胞数比较少
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2012-11-14 08:56 上传

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第二天就长起来了" V' g. {. ^( c: @! g

2012-11-14 08:56 上传

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第三天就该传代了7 u2 b) @$ [# y7 u8 v

2012-11-14 08:58 上传

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原代第三天，需要传代了

" I: ]' o: S% R/ o
7 X* }/ q% U: q" V, \3 e两代过后，细胞纯度有所改善
: O2 U) j: t* w# `4 Z, Q3 K

2012-11-14 08:58 上传

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传代两次后

huangcong1988

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" h% f7 ?1 Y# N" t2 F7 v
! X$ Q0 h0 _' A' f" D. Y你是说消化传代还是说分离细胞的时候？传代的话，5min太长了，消化的话5min就太短了，所以你分的细胞少。浓度都可以的，0.05跟0.25差不多，组织块多就用0.25.少就用0.05，主要是控制用量，还有消化时间，我一般是10ml左右胰酶，20min，一只母鼠

zhusealin

有组织块也不要紧，随着后面传代会逐渐消失的。MEF需要密一点生长

jun8013

回复 南宫燚岚 的帖子' E- Y/ S4 x$ S! S* c- r% u# |

2 ^  f5 T6 u9 r您意思是热灭活？买的进口的，应该还是要热灭活一下，说的有道理！下次灭活下看看

jun8013

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) T5 r" N- ?% Y% E4 N
回复 huangcong1988 的帖子- I9 O! Z# Y( Z9 |! U9 d
2 \, j- o) k6 f. b
太好了，收藏下。请问前辈，您胰酶消化时用多少浓度的0.05%还是0.25% 。还有消化时有一些没消化下来的，感觉还不少，4倍镜下看，这些细胞还要吗？是不是老点的细胞难消化啊& _% l/ G7 N4 g' o
0 T) m8 g. D1 l( L
0.05%消化多久，我感觉我消化了快5min钟

南宫燚岚

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: E% f2 B( f0 {/ K) J3 a8 h' m- ~0 L* B% P' g6 V- I% y$ n  I
FBS最好灭活一下

huangcong1988

回复 fwj81 的帖子3 H6 l' ^+ [+ _( k. x
8 a6 J+ }+ }) ~4 b2 I, H4 Q
这是我上次分的

huangcong1988

回复 fwj81 的帖子  }2 Z9 |" s7 {1 K5 c  {

. Y; g- v- U/ a/ E$ S) u# a10倍镜下看的么？还是有点杂，感觉。