求教 磷酸钙转染

Dongqin11

实验室最近需要用到磷酸钙转染的方法，无奈重复性很差。 想着有一点可能是用的氯化钙不行，我们实验室用的是国药的二水磷酸钙。想问问熟悉的人能不能告知得到较好的转染效率用哪种氯化钙。

rexhz

药品都要用sigma的细胞培养级的。关键不在于氯化钙，问题应该出在HEPES缓冲液上面，HEPES缓冲液对PH要求很严格

hwlightning

磷酸钙转染有两个最重要的两点：1.HEPES缓冲液的PH值   2.细胞的状态，百分之七八十的时候转最好，做这个实验之前应该先刷选细胞种子，把优良的种子多冻存些。如果是转染293细胞，20代左右的细胞转染效率会高些。细胞得状态非常重要，准备大批量包装前先做几皿GFP看看荧光效率。

hwlightning

氯化钙我们也是用的sigma的

Dongqin11

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4 E) q' D9 a  {+ z+ N谢谢

chentian820

氯化钙不要用国产的。偶上次用国产的，配制的溶液都是灰色的。sigma的就好很多了。我们买的是sigma的六水合氯化钙。

碧落

据师姐说，一般细胞密度不要太高40%就够了，因为转染后，对细胞伤害小，细胞还会生长。
! |9 H6 w, V( R& O" t- ]4 P而且细胞要尽量铺的均匀，使每个细胞都很伸展，这样与磷酸钙有比较大的接触面积，有利于提高转染效率。
  c, L, d) @$ P% a& I另外钙转本来效率就不高，可以选择lipo2000，不过就是毒性也比较多了

碧落

据师姐说，一般细胞密度不要太高40%就够了，因为转染后，对细胞伤害小，细胞还会生长。$ w) Z% ~# i6 n: f. _
而且细胞要尽量铺的均匀，使每个细胞都很伸展，这样与磷酸钙有比较大的接触面积，有利于提高转染效率。+ [7 v& _& g* }: o; U6 m6 J2 d
另外钙转本来效率就不高，可以选择lipo2000，不过就是毒性也比较多了

碧落

据师姐说，一般细胞密度不要太高40%就够了，因为转染后，对细胞伤害小，细胞还会生长。1 m4 O  V: q5 C: S: y# O
而且细胞要尽量铺的均匀，使每个细胞都很伸展，这样与磷酸钙有比较大的接触面积，有利于提高转染效率。! A& p4 J* S2 F8 d. l4 y& P9 h4 N
另外钙转本来效率就不高，可以选择lipo2000，不过就是毒性也比较多了