求教磷酸钙转染 - 实验室综合讨论区干细胞之家



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查看: 35748\|回复: 8	go [请教] 求教磷酸钙转染 [复制链接]

Dongqin11

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楼主

发表于 2012-12-19 16:41 |只看该作者 |倒序浏览 |打印

实验室最近需要用到磷酸钙转染的方法，无奈重复性很差。想着有一点可能是用的氯化钙不行，我们实验室用的是国药的二水磷酸钙。想问问熟悉的人能不能告知得到较好的转染效率用哪种氯化钙。

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rexhz

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沙发

发表于 2012-12-19 21:57 |只看该作者

药品都要用sigma的细胞培养级的。关键不在于氯化钙，问题应该出在HEPES缓冲液上面，HEPES缓冲液对PH要求很严格

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hwlightning

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藤椅

发表于 2012-12-20 09:01 |只看该作者

磷酸钙转染有两个最重要的两点：1.HEPES缓冲液的PH值 2.细胞的状态，百分之七八十的时候转最好，做这个实验之前应该先刷选细胞种子，把优良的种子多冻存些。如果是转染293细胞，20代左右的细胞转染效率会高些。细胞得状态非常重要，准备大批量包装前先做几皿GFP看看荧光效率。

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hwlightning

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板凳

发表于 2012-12-20 09:03 |只看该作者

氯化钙我们也是用的sigma的

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Dongqin11

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报纸

发表于 2012-12-20 11:38 |只看该作者

回复 hwlightning 的帖子
3 l/ R" |0 X6 Q, F3 i
谢谢

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chentian820

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地板

发表于 2012-12-20 12:28 |只看该作者

氯化钙不要用国产的。偶上次用国产的，配制的溶液都是灰色的。sigma的就好很多了。我们买的是sigma的六水合氯化钙。

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碧落

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7楼

发表于 2012-12-22 00:19 |只看该作者

据师姐说，一般细胞密度不要太高40%就够了，因为转染后，对细胞伤害小，细胞还会生长。
而且细胞要尽量铺的均匀，使每个细胞都很伸展，这样与磷酸钙有比较大的接触面积，有利于提高转染效率。! n' W3 J. S' Y2 A2 G5 l; {- q5 s
另外钙转本来效率就不高，可以选择lipo2000，不过就是毒性也比较多了