细胞复苏的疑问

huangcong1988

现在细胞越来越娇贵了，以前细胞冻存用40%FBS,10%DMSO,50%DMEM就能配冻存液，而且复苏很容易存活，复苏用10%血清基本上复苏能存活75%以上，而且两天内就能长满传代，以前冻存细胞没有冻存盒，都是用棉花包着，然后直接扔到﹣80。现在冻存液为90%FBS，10%DMSO，复苏时候用15%血清（有时候用含双抗的），复苏长了很久都没长起来，而且细胞老漂，细胞复苏的话，基本只能存活10%，另外最主要的是现在都用冻存盒冻存细胞，到底咋回事啊？

469787350

FBS的浓度不必那么高，50%的FBS，10%的DMSO，40%的DMEM，效果就不错，然后就是在复苏的时候一定要快，千万不要犹犹豫豫。

小时候就很酷

细胞复苏时间和水温的温度很关键，最好把细胞从液氮拿出来以后，直接投放到38度左右的温水里。细胞从液氮拿出后不能在室温暴露时间过长，最好别过1分钟。

雪国叶子

我认为和冻存液的成分关系不大，主要是你冻的第二批的细胞细胞状态可能不好

雪国叶子

我认为和冻存液的成分关系不大，主要是你冻的第二批的细胞细胞状态可能不好

wang3033

用20%FFBS,10%DMSO，70%高糖DMEM试一试，应该没有问题的

xu_shufen

细胞冻存效果好坏取决冻存细胞的状态、DMSO毒性，细胞冻存时最好处在对数生长期，DMSO是一种渗透性保护剂，分子量小，渗透快，在温度高时对细胞毒性大，调整冻存的方法。

yuhaoze

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8 W/ n# F3 t; m2 G/ p% u6 V2 h/ O- f: _( A) j+ @
我现在用40%

huangcong1988

回复 yuhaoze 的帖子2 Y  u/ N/ f: T

3 p% {! ~9 p7 O; L. w加多少D/F12?

huangcong1988

回复 yuhaoze 的帖子9 r/ F1 Q- d8 g, d, f

- l& d+ E& b4 Z* H: i2 K行，那我试试降低血清浓度，按理是血清浓度越高越好吧？