大家收RNA样品时都是怎么裂EB球的

不倒翁

最近在收一些EB分化的RNA样品，发现到后面的天数，d6，d8，d10的时候，随着EB球的长大，裂RNA越来越难了，有时候加入Trizol后几个小时还是可以看见细胞团在里面。加上之后我也会吹一吹，然后裂的过程中晃一晃，还是不行。请问大家都是怎么操作的？望有经验的人士不吝赐教，多谢！

yueweilei

貌似可以贴壁处理后再提。

yueweilei

貌似可以贴壁处理后再提。

haijing12585

回复 不倒翁 的帖子( n- T' g' Y, s  n7 e. T# P5 e2 p0 {! q
$ p  d6 Z0 E! K! {' h/ u. \! _
震荡一下不可以吗？

chentian820

在加trizol之前一定要PBS洗，出去培养基里面的蛋白。然后就是trizol多一点，加了之后用振荡器震荡。效果不错的。

不倒翁

回复 yueweilei 的帖子
( F( c6 |1 `2 ?9 J! L
, E: p- p0 Q# G你那个不是正常的EB吧 铁壁处理的话需要多少时间呢

不倒翁

回复 yueweilei 的帖子8 H8 x) \2 x$ h0 C- {- ^# i
4 x" a" D  L2 v0 g
你那个不是正常的EB吧 铁壁处理的话需要多少时间呢

不倒翁

回复 chentian820 的帖子9 [1 S- H6 P* g) O5 D& U1 L
7 T1 R5 P. l* l* B* _6 U
多谢多谢 我以前都没有洗 EB球小的时候没有问题 大了就不行了 震荡会不会剧烈了点？ 提RNA的时候貌似剧烈震荡的时间都不能太长 要不然会有基因组DNA污染呢

不倒翁

回复 haijing12585 的帖子4 _9 ^, w9 i6 b

& ]+ ~2 q9 D& t/ J' ?! _9 W* L4 b不知道会不会剧烈了点？ 提RNA的时候貌似剧烈震荡的时间都不能太长 要不然会有基因组DNA污染呢  我一般都是拿枪吹一会，放置的时候有时候拿起来晃一晃，但是后面的天数效果还是不好

yueweilei

回复 不倒翁 的帖子
6 c& H0 J) i3 E2 ]# y. L, t; A& k  A3 b/ D  ]1 p! k( L
d8-d9时的EB，换个容易贴壁的皿，第二天就能看到贴好了。不过不知道你的情况适不适用！