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本帖最后由 86964109 于 2013-1-3 11:05 编辑 1 f& p1 Y0 Z% y5 O5 [
0 |% q! G$ m2 O( x E7 K4 b* e大家培养神经干细胞用的是商品化的完全培养基还是自己配的比较多呢，一般培养一瓶细胞需要取几只孕鼠？以下是查了一些资料后设计的实验步骤，请大家帮忙看看可行吗，有什么格外需要注意的细节吗？
% g; y# ^8 k7 G(1)取孕14.5天SD 大鼠 ,引颈脱臼。在无菌状态下剪开腹部皮肤及肌肉，取出胚胎置入D-hank’s液中。
4 m2 }$ N' M; a) ~6 f(2)逐个仔细分离出脑组织置入D-hank’s液中漂洗，剥离脑膜及血管,分离出海马,剪碎成约0.2mm×0.2mm大小的碎片。
0 p: I! v# G! q! n& x(3)加无血清的神经干细胞培养基 [组分为DMEM/ F12 (1∶1) 、N2(10％) 、20 ng/ ml bFGF、20 ng/ ml EGF 、1%双抗]，以Pasteur管轻柔吹打成单细胞悬液,再加少许细胞培养基于离心管，以获取更多细胞。& s `; {4 e6 T) @' j8 K
(4)台盼兰染色后计数，以1 ×106/ ml 的活细胞密度接种于培养瓶中。 37 ℃、5 % CO2 孵育,倒置相差显微镜观察。
) B2 J- U1 T) a1 U% T1 K' \(5)细胞每5－7天传代一次，收集神经球，以神经干细胞培养基重新制成单细胞及小细胞团悬液，以1 ×106/ ml 的活细胞密度传代。; U5 ]6 V6 C9 d; c; u# u' B
3 s4 F. v2 U+ TPS：还有神经干细胞的培养一定要经过自新能力鉴定、nestin 表达的鉴定和多向分化能力的鉴定吗？4 B7 T* C6 v1 T& F/ `
' P1 p9 y0 f: _/ K( q; u! @! |' h谢谢啦 |
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发表于 2013-1-3 11:04
发表于 2013-1-20 22:31
