分离PBMC时的疑问？

gengtongyu521

分离PBMC时，有时会多吸取一些下方的分离液，以免细胞的浪费，这样，再离心时会不会不容易使单个核细胞离心下来，而悬浮在液体中呢？

wenwen1228

不会有影响，加PBS混匀稀释后分离液的浓度很低了，不会使细胞悬浮离不下来的。

weijunning

本人建议只要把白膜层吸干净就行了，没必要再吸一些分离液进去。如果用于CIK培养，2X107的PBMC就行，完全能将细胞养到109.  因为分离液也是对细胞有毒性的，如果清洗不干净，反而影响细胞生长。

cheeray

如果你怕收集不全。可以收集时多加几个管。

joe_binyang

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充分混匀稀释液是必须的，分离液是水性的，只要混合充分，一定能溶解扩散，不影响效果

wwxx66

不充分混匀肯定离心效果不好，吸白膜层时尽可能将白膜层洗干净，将白膜层吸出后加入到生理盐水或PBS中，离心前上下翻转一下离心管使其充分混匀，然后2000转，8-10min就可以避免细胞的丢失！
/ W. r( ?! q- a; y# s- X你可以将上清液再次倒入新的离心管中再次离心看一下，我就尝试过，混匀充分后，不存在细胞的浪费！

spring1221

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除了用PBS洗，用盐水或者1640洗可以吗？

ljl1988115

这种情况可以适当增加一下离心机的转速

cheeray

扩大洗涤液体洗涤。。。你可以多用几只离心管。 这样可以多收集细胞。。。

天天天雨雨

若觉得有影响，可以先只吸取明显的白膜层放入一个离心管中，然后下层若有较浑浊有细胞可以单独放入另一个离心管中一起离心，
& n) w4 D" W! ?/ Y, h1 T7 `  Z我们这样做过，有时候下层的淋巴层有不少细胞，有时候很少便弃掉