脐带组织块贴壁法求助

老姜

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你用低面积多大的培养瓶养细胞，Ｔ２５总量只能加５ｍｌ液体，Ｔ７５加９ｍｌ还行，平底若铺了血清应该将血清晾干放组织块不漂的可能性才大，液体加多了，浮力大自然漂。培养瓶培养挑出组织块是不易操作的。培养细胞血清的浓度不是愈多愈好，最终不超过２０％为佳，因为体内废物的清除通过血液，血清中的含量也不能忽视。物极必反！

spring1221

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第一次加液有组织块飘起来是正常的，建议加液时间再延后一点，倒置24小时后加液，贴壁时间太短，加液后就很容易让组织块浮动。组织贴壁法筛选的间充质细胞纯度比较高，也比较容易操作，有些文献报到动静脉跟表皮清除不干净都可以长出来，所以关键还是培养液的选择跟操作熟练度。祝你早日成功

湖南干细胞

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谢谢，换液前不敢动了。但是第一次组织块添加液体前就飘了好多。

湖南干细胞

组织块贴壁法培养皿要铺多聚不？用玻璃的还是塑料的？
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湖南干细胞

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4 E) {! X- l8 S: ~* }; }- ^谢谢。1）脐带在半小时内开始操作，PBS冲洗3次后，剥离动静脉，撕出白色胶块（时间1-2小时）；2）剪碎（0.5-1小时）成0.5-3mm小块，倒入离心管，PBS 1000rmp，5min洗涤1次，添加1ml 培养液，组织块倒入到FBS包被的培养瓶中，9小时后添加培养液至没过组织块，此时已经有细胞爬出，并且很多组织块都漂浮 ，1天后大量细胞爬出，3天后半量换液，换液后细胞仍在，第5天细胞就基本上消失了，只有完全漂浮组织块及细胞碎片。没有每天动培养瓶，组织块就是贴壁不紧。

老姜

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你不妨将组织块用PBS洗涤后，直接加在新的干皿上（实质组织块还是湿润的），量要少于你第一张照片上的量，放入培养箱中3h后，轻轻加入8ml生长液，直接放入培养箱内，4-5天半量换液（这期间不要拿出来看呀，找相呀，太折腾了，它没法贴安身)以后三天半量换液，直到12或15天后，再根据细胞生长状况决定是否吸弃组织块。

单个核细胞

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- X/ ~* {1 I$ i/ [组织贴壁9小时就能爬出细胞？你说的是这个意思吗？你可以描述一下你的培养过程，如组织贴壁时间、加液时间、组织周围爬出细胞时间、换液时间等等。这样大家才能知道你的困惑帮你解决问题。
& o- v. t/ k* D0 q* a
7 ^* s& G* @0 d  r另，参考下面的链接：
, `; w+ l# g/ Z: z2 ^
0 |- O9 v$ a* S" A脐带间充质干细胞的贴壁分离方法：8 C, A, \; D6 }9 a' q0 f- i6 P
http://www.stemcell8.cn/forum.ph ... mp;page=1#pid554020: g" X; C6 _+ V
请教华通氏胶的剥离：6 A9 b2 L- T6 g( O5 v0 N
http://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html
, d& a5 U+ I" T" D; A- Z应用怎么样的培养技巧可以获得更完美脐带间充质干细胞：' w" L9 Y! O# W& [- o# T
http://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html
7 N' r) G, B6 k5 X: Y脐带间充质胶质的备置：! E8 ]/ f1 D7 z, ^* N/ w
http://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html
' ~. `1 A% H4 Z! L4 ^" ]脐带间充质细胞贴壁法出芽率怎么这么低：
4 I/ `! K* V* s: ~http://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html
* w- N( I. n3 l& N9 \2 h脐带间充质贴壁法到底几天换液：7 Q( h- ^2 N+ R7 z: Z5 u* v& _
http://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html
& M( V! u8 _$ X$ s0 o. _各位大虾能把自己养的脐带间充质细胞出来晒晒吗? & @# R4 m% W! k% q# s
http://www.stemcell8.cn/thread-56179-1-1.html
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湖南干细胞

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我的细胞基本上没有长成成纤维样的，但是瓶底用FBS铺了，确实是从贴壁9小时添加培养液时就有细胞爬出来，组织块贴壁不紧，常在第一次添加液体时就已经漂了，3-5天后换液细胞状态还可以，再过1、2天，细胞就碎了。是不是组织块贴壁不紧。

湖南干细胞

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  d% ?' m( L9 ]* r4 h3 Z- d: ]) B7 q; x3 r2 H6 O
我的组织块贴壁不紧，9小时，第1次添加培养液时就基本上全飘了。后两张是爬出来的细胞，肯定不是皿底的东西，是爬出来的细胞，最一张是细胞碎解了。

老姜

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" H0 ?6 k) V7 L( j4 i" ], ^1 @: D
43楼的细胞照片，梭形细胞长成大片了在右下角还见组织块了。你再细细琢磨琢磨。