脐带组织块贴壁法求助

单个核细胞

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: d$ m$ b3 p. E' B9 [- Q回复 湖南干细胞 的帖子% B" g" D9 Z0 G% g" O4 E
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你确定有细胞从组织周围爬出吗？从你的描述以及照片加上时间推断，不大可能，你注意看一下是不是培养瓶底的东西，而不是你说的“爬出来很多细胞”。
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我这里附上一张组织周围爬出细胞的照片，如下图。
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单个核细胞

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组织贴壁9小时就能爬出细胞？你说的是这个意思吗？你可以描述一下你的培养过程，如组织贴壁时间、加液时间、组织周围爬出细胞时间、换液时间等等。这样大家才能知道你的困惑帮你解决问题。
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$ |7 H% z8 s" X0 j1 a& N另，参考下面的链接：& y3 _2 K# n( L! w# p' v7 Z
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脐带间充质干细胞的贴壁分离方法：
; T: L& g$ o6 N) Lhttp://www.stemcell8.cn/forum.ph ... mp;page=1#pid554020* E6 Y% D8 m2 P
请教华通氏胶的剥离：
" o8 w* a3 ^. B% O+ Qhttp://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html. C) I8 [! C& ?8 `$ z" u5 H4 w
应用怎么样的培养技巧可以获得更完美脐带间充质干细胞：7 X, ^. B# U: M$ Z3 X4 u0 k
http://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html% ~. B* H. I: |) v+ [. y% ]% b
脐带间充质胶质的备置：
) \: a# d6 h+ M1 J! Q0 |& Y( whttp://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html9 D$ `( B& W; s1 Y( [; x0 {
脐带间充质细胞贴壁法出芽率怎么这么低：3 E- k5 P5 e$ c$ F$ Y
http://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html- I5 p! I" f( C. [+ o
脐带间充质贴壁法到底几天换液：
. X. a, n- W" q% \http://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html$ i/ ?/ e3 p+ |1 R5 r# q+ ~
各位大虾能把自己养的脐带间充质细胞出来晒晒吗?
; c6 V/ E# `  s; u" F- ahttp://www.stemcell8.cn/thread-56179-1-1.html3 ~) P) L: t' @9 o* |

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几条建议：
' P* X2 f# ^+ E; b! v& u1.华通胶剪碎后不要洗涤，直接接种组织至培养瓶/皿。
8 \) [3 Z+ ~% n( \3 B* F8 h2.若是采用进口（康宁等）培养瓶/皿，不需要FBS包被。
( v9 ?2 R4 r; T! K& t% H- d3.贴壁3~5小时后补加培养液(下午接种的可以第二天加液，即贴壁过夜)，加液后的培养瓶/皿就不要经常动它了。9 c5 o4 p- l% C- O7 X( l
4.第二天观察是否污染，8~10天后观察是否有细胞爬出。
* |* N" {# \$ S* {, ]: `! D/ o5.细胞爬出后，可去掉旧培养液和组织块，换新培养液。
: z, N9 p1 ^  M5 ^6.待贴壁细胞局部生长致密时，常规方法传代。

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传代用0.25%胰酶即可，T75瓶培养，1:3传代，也可以根据需要接种相应的细胞数，比如2×10^4 cells/cm^2，1×10^5 cells/ml 等等。