脐带组织块贴壁法求助

单个核细胞

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回复 湖南干细胞 的帖子. w  @$ T. ]8 H- Q  h* r# T2 c

- ?' \, b1 ?6 [# j  f你确定有细胞从组织周围爬出吗？从你的描述以及照片加上时间推断，不大可能，你注意看一下是不是培养瓶底的东西，而不是你说的“爬出来很多细胞”。6 }- j# L) P/ |; `4 I6 W

) b. d' \; }- w, y我这里附上一张组织周围爬出细胞的照片，如下图。
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单个核细胞

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* z7 D9 L6 R& ~$ }* G/ G' h; p0 M' X9 |; `组织贴壁9小时就能爬出细胞？你说的是这个意思吗？你可以描述一下你的培养过程，如组织贴壁时间、加液时间、组织周围爬出细胞时间、换液时间等等。这样大家才能知道你的困惑帮你解决问题。( e: p! }9 H% c

# ~+ k; H, c1 ?/ z3 W9 _( [另，参考下面的链接：( ~  o  x: J! a  Y* A# W# ~* C, o

' b$ r! G% K$ j; L& ^5 d脐带间充质干细胞的贴壁分离方法：
2 T3 m! |/ r, _0 a" phttp://www.stemcell8.cn/forum.ph ... mp;page=1#pid554020
7 u5 B# g1 ?8 a- U请教华通氏胶的剥离：
( R: ?8 e$ y* \, o/ i# n7 g" N+ Ghttp://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html
; x# A  |" ?2 ~0 ]- F应用怎么样的培养技巧可以获得更完美脐带间充质干细胞：& G! ^% K8 t& P" d
http://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html
# w4 P' A' M% o8 g, X# ~脐带间充质胶质的备置：% ~: R5 K8 R+ i1 i( }$ k
http://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html
2 s4 |& Z, A4 T! M脐带间充质细胞贴壁法出芽率怎么这么低：
: D7 l" J8 X) chttp://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html
* \0 S# {% Y" L6 E5 H7 u脐带间充质贴壁法到底几天换液：" W1 u# M- }6 J' J) k/ {! E- X: ]% Z
http://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html4 x6 Z) ^- k* O
各位大虾能把自己养的脐带间充质细胞出来晒晒吗? 1 E$ l  \* ^4 z( f4 ]+ C  e
http://www.stemcell8.cn/thread-56179-1-1.html
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8 o" i% ?( D0 S, ?$ r) }+ [几条建议：2 y& {: z5 s: [& k  C
1.华通胶剪碎后不要洗涤，直接接种组织至培养瓶/皿。* H; F& U$ d5 R$ u3 q" ]
2.若是采用进口（康宁等）培养瓶/皿，不需要FBS包被。
5 _: u# t, b$ n4 u2 M' r3.贴壁3~5小时后补加培养液(下午接种的可以第二天加液，即贴壁过夜)，加液后的培养瓶/皿就不要经常动它了。! z: r/ ?. g; |" p
4.第二天观察是否污染，8~10天后观察是否有细胞爬出。
9 S+ R; Q# L5 N! A( a+ ?! a5.细胞爬出后，可去掉旧培养液和组织块，换新培养液。
8 q% y, [. x. @( @% V6.待贴壁细胞局部生长致密时，常规方法传代。

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4 I  t% y) ^) C3 t% d9 q传代用0.25%胰酶即可，T75瓶培养，1:3传代，也可以根据需要接种相应的细胞数，比如2×10^4 cells/cm^2，1×10^5 cells/ml 等等。