如何形成拟胚体EB

wwy551

回复 小ga 的帖子6 Q( a! ?  D, M6 a8 ~- R3 Y

8 F/ t  Z/ F* w& e( o版上之前已经有很多做EB分化的讨论，可以找来看看。一般就是用dispase消化，时间可以久一点，把克隆轻轻刮下来或者吹打下来，静置沉降后，吸去上清，加DF12重复一遍。用HESM重悬克隆接种到低贴附板上，第二天开始换分化培养液，换液前先吸去HESM，用配分化培养液的基础培养基洗一遍克隆，去除HESM里面带的细胞因子。: j1 T# E+ c* Z$ }
至于做EB分化用的分化培养液，看你想向什么分化了。一般向外中内三个胚层分化都有比较常用的细胞因子，可以参考文献，看看大家比较通用的是什么。

wwy551

回复 小ga 的帖子. }/ j  h3 k/ R! w/ A+ M  `! {3 o

0 N2 L; U. i, r* p消化成单细胞之后接种

wwy551

回复 echoxy1020 的帖子* l" s4 z, A6 i) }( E' e6 D
& r6 ^/ n; p# ^% L" d- P4 p8 r6 D. m
human embryonic stem cell medium 人胚胎干细胞培养基

wwy551

回复 echoxy1020 的帖子7 u0 `1 J9 O& @2 q6 X
7 o4 n$ f, s6 B/ S1 ]2 L
我以前做过用人的ES细胞通过形成EB再向造血细胞分化。感觉形成EB挺简单的，当时的做法就是用dispase把ES消化下来，消化时间久一点，可以把克隆拍打下来或者用1ml移液管刮下来，收集到离心管中静置，待克隆沉降后，吸去上面的液体（包含很碎小的ES克隆和MEF），用DMEM/F12重悬，再静置吸去上层液体。最后用ES的培养基重悬，接种到低贴附培养板里。培养两天，然后换成分化培养基诱导分化。