如何形成拟胚体EB

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% A+ M% `+ l* Q6 l+ z+ |( ^版上之前已经有很多做EB分化的讨论，可以找来看看。一般就是用dispase消化，时间可以久一点，把克隆轻轻刮下来或者吹打下来，静置沉降后，吸去上清，加DF12重复一遍。用HESM重悬克隆接种到低贴附板上，第二天开始换分化培养液，换液前先吸去HESM，用配分化培养液的基础培养基洗一遍克隆，去除HESM里面带的细胞因子。2 P# ^- b/ p2 Q* V/ `  a0 L
至于做EB分化用的分化培养液，看你想向什么分化了。一般向外中内三个胚层分化都有比较常用的细胞因子，可以参考文献，看看大家比较通用的是什么。

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消化成单细胞之后接种

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, {1 q/ E+ ?, V; l6 s& F3 Lhuman embryonic stem cell medium 人胚胎干细胞培养基

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. J5 m, G1 Q: z* a/ q8 J$ G3 t我以前做过用人的ES细胞通过形成EB再向造血细胞分化。感觉形成EB挺简单的，当时的做法就是用dispase把ES消化下来，消化时间久一点，可以把克隆拍打下来或者用1ml移液管刮下来，收集到离心管中静置，待克隆沉降后，吸去上面的液体（包含很碎小的ES克隆和MEF），用DMEM/F12重悬，再静置吸去上层液体。最后用ES的培养基重悬，接种到低贴附培养板里。培养两天，然后换成分化培养基诱导分化。