如何形成拟胚体EB

小ga

请教各位战友，hES和iPS如何形成拟胚体EB ?EB形成后，主要想往神经干方向分化，如果采用悬浮培养，EB培养液应该如何配制？看了好多文献，EB培养液也各有不同，不知如何选择，请各位赐教！灰常感谢！

wwy551

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版上之前已经有很多做EB分化的讨论，可以找来看看。一般就是用dispase消化，时间可以久一点，把克隆轻轻刮下来或者吹打下来，静置沉降后，吸去上清，加DF12重复一遍。用HESM重悬克隆接种到低贴附板上，第二天开始换分化培养液，换液前先吸去HESM，用配分化培养液的基础培养基洗一遍克隆，去除HESM里面带的细胞因子。
% c2 K+ A$ w5 `! V8 z6 y至于做EB分化用的分化培养液，看你想向什么分化了。一般向外中内三个胚层分化都有比较常用的细胞因子，可以参考文献，看看大家比较通用的是什么。

小ga

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谢谢！还有一个问题。形成EB后，是直接将EB接种到Matrigel包被的孔里，还是说需要胰酶将EB消化为单个细胞后接种？望指教

wwy551

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消化成单细胞之后接种

小ga

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- c- h1 g" V: L" q( y! x非常感谢

小ga

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) l& G) `7 ]4 `- G+ n. M/ Z) d' h是用0.05%的胰酶吗？可不可以用Accutase呢？

ligangtiancai

我们实验室是用IV型胶原酶将iPSC克隆消化下来后吹成小团块做EB的，效果不错

echoxy1020

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您好，弱弱地问一下HESM是什么？您是指悬浮的克隆碎片会自然生成EB吗？

wwy551

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human embryonic stem cell medium 人胚胎干细胞培养基

echoxy1020

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我最近在做用人ips细胞形成EB，方法是用EDTA消化掉滋养层细胞，然后收集ips细胞制成悬液，加到96孔板离心，原则上应该24小时后就可以形成EB了，但不知道为什么总是不成功，不知道您有无相关经验，请赐教，谢谢！+ `; m5 u- R$ w# J
然后我查了下其他方法，悬滴法是否适合人ips细胞？如果可以，悬滴的培养液用什么？形成后悬浮培养用的培养液要更换吗？待到EB接种到matrigel后再换分化液？4 V3 R. V0 @2 Y
悬浮法看起来好像更简单一些，而且也许因为没有成单细胞是不是成功率会更大一些？但是如何控制EB大小？我看你说第二天可以换分化液，那什么时候种EB呢？9 ?/ t: V' ^! k1 o+ n
不好意思问题比较多，做了好久都不行，实在是焦灼😂😂😂