iPS的EB分化成beating的团块后如何弄成单个细胞来染色

frankieisme

iPS的EB分化成beating的团块后如何弄成单个细胞来染色?

Jonathan

胶原酶4，消化30分钟，然后胰酶5分钟。搞定

frankieisme

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* z: n' X) |% X+ j
我用0.25%胰酶，另外机械吹打得方法都试过，效果不好，细胞大多噢度死掉了。你做的时候胶原酶IV和胰酶的浓度呢？

Jonathan

胶原酶 1mg/ml，胰酶是用0.05的。

若兰汀

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9 ^' M& v) N. E胰酶是用0.05%的，含EDTA吗,请指教

Jonathan

回复 若兰汀 的帖子" G( ^; Y) I0 R/ c% ^* `7 j! F

. S$ i1 s7 b2 q是的。有一个很重要的步骤，就是胶原酶4和胰酶用之前，一定要先预热到37度。切记切记。这样处理，最后很少死细胞，而且cluster也都基本散开了。

frankieisme

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6 R+ J: |7 r9 O
- m4 Q+ I1 p# O/ o你是做小鼠还是人的iPS 细胞?

Jonathan

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  s' A! ?, {& _1 M% }( q4 ?! }$ ?( i- p* p, l, q+ f
人的比较多。鼠的少一点。大鼠和猪的做过一些

frankieisme

回复 Jonathan 的帖子7 t" A& |* X4 F8 K

  n% W3 \/ k! Z2 V7 d* P, }9 p人的iPS是feeder还是无feeder培养的?分化的过程是悬滴or贴壁?加了那些因子?

Jonathan

回复 frankieisme 的帖子! k3 h  G8 T  [$ v. v0 `
2 m2 C: K- S3 e" [4 t+ Q3 C+ F# k
全程无feeder，包括诱导。分化过程是用自己的protocol，最近在写，还没发。