大鼠骨髓间充质培养求鉴定附图

湖南干细胞

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6 {# I# i( f. h做了一次大鼠骨髓间充质的培养，以上是全骨髓贴壁法培养第4天的图，及淋巴分离液法第3天的图$ p% A) [9 q/ Q; u/ t
淋巴分离液法的细胞长得好像放射状，有点像神经干细胞分化；
! g; d+ ?7 l: k& y全骨髓贴壁法有很多圆形细胞，成纤维形细胞部分折光性很强，部分很弱，像不像骨髓间充质？

老姜

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& P8 k, S1 a4 p. n全骨髓发的大圆细胞多为破骨细胞等，一传代它因不被消化下来而自然淘汰了，不用纠结。上图似乎是含油脂的骨髓基质（也可以认为是黄骨髓的小粒——含血细胞很少）。在常规传代后这些细胞优胜劣汰自然会消失，随着传代次数的增加，成纤维样细胞进一步纯化。下图的圆形细胞应该不是成纤维样细胞，随着传代次数的增加，也会被淘汰，从而达到纯化的目的。你养的细胞很不错！

湖南干细胞

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; C' Z$ o, P9 A5 f( I) W) ~, Y
: l9 C5 I" m/ s) Z) |谢谢你经常指导。这是第一次做骨髓。谢谢。

素心无痕

下图圆形的似乎觉得是造血干系细胞，当然如果后期有定向诱导可以分化成为破骨细胞。上图有脂肪粒

孙帅帅

细胞很杂   那些贴壁的应该是！

湖南干细胞

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  U4 S' A7 u% c% E
5 v+ {5 `4 R) L0 R9 ]( L3 a骨髓间充质是2.24日养的，昨天（图1消化前，细胞较前一天无明显平铺增殖）用0.25%胰酶0.8ml/T25瓶 2min消化，2ml10%FBS-D/F12终止消化，离心1000rmp，5min后收集细胞，重新培养（消化后，很多细胞都没有消化下来图2；）今天换液后细胞状态大变，镜下可见强折光性的细胞周围大量白色片状物质，拍照后显示为蝙蝠状。这是老化了?还是细胞被胰酶伤到了？, k6 T7 l- A% |# w5 o+ k
如果没有消化的细胞的细胞核折光性变差，变扁平又是什么原因？

cheetah2020

回复 湖南干细胞 的帖子/ o0 s  S' u8 j8 `9 q4 J6 w

0 p  q" }) D* e8 U% h/ i& U这要看你消化前的状态怎么样了，如果贴的很好，不要考虑时间（酶活性差异较大），看细胞明显变形即可终止消化，加入终止液后用枪吹吹。
& f( {+ i0 P/ p7 l从形态上看觉得第3张生长的更好，MSCs应该是这种多边纺锤形。

湖南干细胞

回复 cheetah2020 的帖子! |2 B8 o6 i5 n9 L' v. N

- a1 {7 ~2 {/ W% S  U7 x+ V谢谢，今天细胞又长回梭形了，细胞增殖也很明显，可能是处于分裂相吧。

老姜

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, F  Y6 G8 b  I) |5 D+ r  m- F9 R
骨髓间充质细胞的生长状态很受供者年龄的影响。消化细胞T25瓶用0.25%Trypsin 0.8ml量是多了，Trypsin对细胞的损上是大些，大鼠骨髓原代消化10min以上，不下来的细胞大多是破骨细胞之类的，完全可以弃之。人的细胞T25瓶用0.05%Trypsin-0.53mM的EDTA0.5ml消化3-5min效果就好，人的细胞“娇气”些。

redmoon

建议原代的时候后ACK纯化，然后培养，BMMSCs会更纯一些。