饲养层加fgf后，细胞形状变长，变细，培养液很脏

yuhaoze

诱导ips的时候用的饲养层，确定了没有支原体污染，用MMC处理之后，不加fgf的时候细胞挺好的，加了fgf细胞形状就变得细长，而且很多细胞碎片，这样正常吗？会影响ips诱导吗？

chips100

关注楼主中，我也遇到这样的问题，原来养的ok，现在出现的问题，怀疑是mef质粒不好。求楼主qq( j7 N/ I, p8 W- P* B% x+ V" r
交流

184lj

是使用了 Invitrogen的 KSR 培养基和血清的原因吧？我做诱导也是这样的情况。

第一心音

我认为是丝裂霉素的作用，我的饲养层在处理后没铺入就开始变长，这个问题不大

yuhaoze

回复 细胞海洋 的帖子' l! ?/ C, G- L6 p' i6 Y5 l

6 I  J5 n! X  |' K3 b7 b明白了，我的图太大。谢谢海洋哥

细胞海洋

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9 k7 L2 J. l) b; i  K( q" @% g5 i2 r1 q/ S* M
单个图片不要大于1000kb 过大 压缩或者截图

genedu

楼主说的现象是常见的，诱导人iPS时，在feeders的板子上，加human ES medium后，不出两天feeders的状态就比较差了，不过在我的诱导过程中，并不影响后续的实验，当然实验过程中可以补加一些feeders或者用conditioned medium来补充营养

yuhaoze

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5 U! f) R  x! f- }, n& W) E$ ]& A4 i; r& S
能加您qq吗，您有空的时候想你请教一下细节

yuhaoze

回复 Jonathan 的帖子
: T/ r3 R% P. i- W* v- o. [/ o
% `/ m# |& _% E/ L4 r; K' Z( K我现在已经能把病毒做好了，不过滴度不是用流式细胞仪做的，是数荧光数出来的。下一步就是诱导了。要是能不用feeder cell就省事儿多了。

Jonathan

回复 yuhaoze 的帖子* J2 l7 L3 w2 A- r6 j: a

  W' d. {3 W5 J8 R% T9 {当然了。诱导ips，我做过起码一百次了。。。我现在自己也在实验室建立了ips的平台