饲养层加fgf后，细胞形状变长，变细，培养液很脏

yuhaoze

诱导ips的时候用的饲养层，确定了没有支原体污染，用MMC处理之后，不加fgf的时候细胞挺好的，加了fgf细胞形状就变得细长，而且很多细胞碎片，这样正常吗？会影响ips诱导吗？

king8

问题不大，我也经常会碰到这样的现象

yuhaoze

回复 king8 的帖子) @- @8 _. W. B: ~

9 D% v9 h4 o' {' _* o& W5 H谢谢！

yuhaoze

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: u' p9 [0 U; g4 f
" D9 P: x9 t" R那诱导的时候，是将病毒感染后的细胞接种到MEF之后，第二天换带有fgf的ES培养液吗？还是过几天再换？

Jonathan

回复 yuhaoze 的帖子& K; |% i5 Z1 X  ~3 `
4 m9 f8 o4 ]  y/ V8 C
MEF变细长是因为你换了KSR media的原因，不是因为其中带了bfgf。一般是接种到MEF之后，隔1-2天换成KSR media，也就是普通的human ES standard media。你也可以试试用coat 了matrigel的6-well plate试一试，不用feeder，这个方法我试过N次，屡试不爽，很好用。

yuhaoze

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我有matrigel，你说的铺完matrigel之后，就把感染完了的细胞接种上吗？
! r7 X& d# y5 ?+ z7 b( }' J: ~那培养液用的是ES完全培养液，还是conditioned培养液？% H; M& V; S3 a3 _& G; u, S+ r+ K
我试过了，KSR media培养的MEF，跟用普通血清培养的形态差不多，不过一旦加上fgf之后就变脏了。
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yuhaoze

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# S- ~" N: \! ~2 K' h这是图片

yuhaoze

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5 B3 i- O4 o! G0 P0 ~图片
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yuhaoze

怎么传不上图了呢

Jonathan

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你说的ksr和普通血清的MEF，要养一段时间，就会发现MEF变细长，看起来好像营养不良的样子。然后培养基会有点脏，可能是因为死细胞多了，细胞碎片多的原因。因为KSR media里面是用血清替代物，所以养分不够。感染后的细胞，直接种在matrigel coated plate里面，开始两天可以用你原来细胞的培养基。第三天再换mTeSR1或者E8，或者conditioned media。我推荐前两个。