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请参考下我看到的这篇，转载给你，看能否有些帮助。
6 f! p7 R, J# S t- R6 ~: b8 j5 l3 M. Z4 V
流式细胞周期检测& A, R" j4 U9 \
5 z% \' Z+ o( O& u: W+ R7 K ~, Y9 y
流式细胞周期结果图解读(附图详解)Time：2010-12-07 PM 19:03 Author:bioer Hits: 51 times ) c1 H/ G$ R; ~& `
流式检测细胞周期操作步骤" b z; X5 f; Q' a! i) b
1. 细胞培养：8 O7 R4 W" Q/ T& ]8 u; N/ l
1 X. t, r* e% c. g/ G
取对数生长期的细胞，按1×106cells/ mL以1mL接种24孔板或2mL接种于6孔板内，进行所需的处理（比如加入药物），特定时间后终止培养，进行下一步的实验。
5 e3 U H$ z$ l4 S2. 细胞固定：# I+ G# @* F, i1 S; T
800rpm离心5min，收集细胞沉淀，弃上清，用预冷PBS洗涤两次，加入预冷75%乙醇，于4℃固定4h以上。3 e1 ~" u1 X! Q! |7 F
3. 细胞染色：
7 `# U |# {4 g* q# k& J
- l+ v r0 R6 n/ w$ b 1500rpm离心5min，弃上清，以3mL的PBS洗涤一次，加入400uL溴化乙锭（PI，50ug/mL），100ul RNase A（100ug/mL ），4℃避光孵育30min。
2 z; ~: I( q$ U6 Q5 I: g! m$ \
1 p3 J' ~, K6 @4. 流式分析：- f/ u: s% `! X9 B
以标准程序用流式细胞仪检测，一般计数2~3万个细胞，结果用细胞周期拟和软件ModFit分析。
$ ~0 s) B: m3 o6 P
' c/ h9 m0 S0 l5 b注：上机前要以50um尼龙网膜或35um细胞过滤器过滤细胞！因为PI具有很强的粘附性，容易使细胞聚团！& a8 D' q: ]2 p! |6 w, L$ _7 { W5 S
) U, g3 O, O( p
; p2 p! B; f0 b) a$ @# D流式细胞周期结果图解读 . H2 A2 h8 g l# ~) `' l5 j& P
首先来认识一下流式细胞周期结果图：
7 R+ L& @, ]3 F* _0 J8 [" N + i! R; ]# s# a! X/ b6 [1 _
% C+ R2 [3 l, N. r( Y" c* d 1、纵坐标Cell Number：即计数的有效细胞数；, c0 n" f: ` u, {
2、横坐标DNA Content：即DNA含量；
! r7 v& w8 N) l. \ 3、G1、G2、S三期在图中已经标示；
3 H9 i4 e _* J1 n" \& S% f% A 4、右侧数字含义：Dip G1-53.84% at 55.56，即G1期DNA含量平均值为55.56；53.84%即G1期细胞数占总数的53.84%；Dip G2-5.64% at 107.72，即G2期DNA含量平均值为107.72，5.64%即G2期细胞数占总数的5.64%；以此类推…
* J+ k7 `! O: I O, m% V流式细胞周期结果图的意义，主要从细胞周期的角度看各参数的意义：+ p( r+ r: n( q2 f. ^8 Z
1、细胞周期指由细胞分裂结束到下一次细胞分裂结束所经历的过程，所需的时间叫细胞周期时间。: I K w# q1 O$ ]: h
) L s" ?/ G, J: F: V
可分为四个阶段：6 ~4 p) H7 x. ~. ^5 a
9 n' b2 N4 H" Y4 l- R# \7 v
1 U6 S% g- @9 [) e" O6 x! Y ① G1期(gap1)，指从有丝分裂完成到期DNA复制之前的间隙时间；# j# ^+ `7 L! r/ H. C5 k- k
② S期(synthesis phase)，指DNA复制的时期；0 Y4 Q( |- }' p/ g: @7 y3 d
③ G2期(gap2)，指DNA复制完成到有丝分裂开始之前的一段时间；
6 ?2 [3 `9 {" i; i/ \: u ④ M期又称D期(mitosis or division)，细胞分裂开始到结束。, V& Z) A/ ]/ x9 B5 R2 g5 W
2、从增殖的角度来看，可将高等动物的细胞分为三类：- k; ]$ N9 f- |+ ~& J% j U
①连续分裂细胞，在细胞周期中连续运转因而又称为周期细胞，如表皮生发层细胞、部分骨髓细胞。
6 U, s9 R3 [7 a# ?2 R6 u# x ②休眠细胞暂不分裂，但在适当的刺激下可重新进入细胞周期，称G0期细胞，如淋巴细胞、肝、肾细胞等。- R. E8 Q- Y4 J8 p ?8 j. u
③不分裂细胞，指不可逆地脱离细胞周期，不再分裂的细胞，又称终端细胞，如神经、肌肉、多形核细胞等等。
: n1 P- c' Q$ M9 f/ ~$ @ 细胞周期的时间长短与物种的细胞类型有关，如：小鼠十二指肠上皮细胞的周期为10小时，人类胃上皮细胞24小时，骨髓细胞18小时，培养的人成纤维细胞18小时，CHO细胞14小时，HeLa细胞21小时。不同类型细胞的G1长短不同，是造成细胞周期差异的主要原因。
$ |4 {7 @0 S; b3、流式细胞结果图各参数的意义：- j% M* L- s( {/ `+ v
9 \/ Y q& S K* r+ ~ 9 R" o( X4 a6 E% I
常用的流式细胞术分析细胞周期的方法是依据细胞DNA含量（横坐标）来分析的：: P [+ Q. p* E0 ?: g
G1期：DNA复制还没开始，也是DNA含量最少的，即流式检测结果图的第一个峰；
, N' H4 b; ~2 V# x: Q9 @- c S期：DNA开始复制，到完成复制，是一个一倍DNA到二倍DNA的过程，在流式结果图中显示期跨度特别大（第二个不高但很宽的峰）；
- p, E. {1 a& b2 p6 ]8 {+ g G2期：DNA复制完成至分裂的一段时间，此时细胞内含二倍DNA，在流式结果图中的第三个峰；
5 q Y% \2 z( i4 d h4 | z M期：细胞分裂过程，此时细胞内也是二倍DNA，用DNA含量的方法是无法与G2期分开，所以有第三峰明显升高时报告：G2/M期阻滞。( O. }/ [9 y. }( w
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发表于 2013-3-12 10:18
发表于 2013-3-12 16:03
