电转试剂盒LONZA以及电转细胞与质粒比

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求问LONZA电转试剂盒全名，用于电转角质细胞的用哪一个？电转仪参数？
2 W$ g$ T$ q; h) z6 Z) G0 c$ n另外电转的时候细胞和质粒的比例大概多少合适？看之前论坛里发的“细胞和质粒的比例我用过30ug-80ug：106-107”这个是100万的细胞用30ug的质粒吗？

oooet

回复 云下的风筝 的帖子9 {3 `. c4 Z; X0 y

& K. l, x5 [* X6 V& t/ @/ w* A5 l8 U加我qq吧  1270050018，不知道我的电转程序是不是能用于你的实验

云下的风筝

回复 genedu 的帖子- Z" s9 v9 v7 p2 K0 g  o6 ?& d
4 P* }: [. t2 f- K8 Y6 J
您好，genedu，请问您是否有用过Lonza的试剂盒电转过T细胞，这块经验空白，买了个试剂盒，电转了好几次，活细胞就10%:L

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前辈您好，我最近想用Lonzad 4D X-unit 电转仪转染脂肪干细胞。之前没有用过电转仪，想向您我请教一下：您们用的电转缓冲液是专门从Lonza 官网上购买的吗？还是直接用opti-MEM呢？打扰您了，谢谢。

genedu

回复 royltc 的帖子
: j) t9 L& t6 W: z2 D# f" A, T# R- X$ F0 c- p. e% _
是一些细胞碎片之类的东西，有可能你还得多摸索几个转染程序

royltc

回复 genedu 的帖子
( d% |) M9 M  v8 [# C/ {3 {
' X4 |$ p( r; B) F' o+ G8 t你好，我用solution T转染的cho-k1 ，转染之后培养基中就有黑黑的点状或者片状的东西，细胞死亡也差不多一半的样子，请问那些黑黑的东西是什么啊？

缥飘实验员

回复 genedu 的帖子* j6 }- X& Q; }6 D7 L* h

$ T$ U$ x+ X4 L% }' @* X; t5 ]0 C前辈好，请问有没有做过 H1和 H9 的电转，现在使用 lonza NucleofectorTM 2b device 仪器，0.22的杯子，细胞100万个，100ul体系。使用 A-023程序， 现在做了GFP  2ug、7ug 的电转实验，连 GFP 都没有转进去，零星的看见几个细胞。
0 M+ i- G0 n2 E$ k2 p/ O. I) ~1、转后接种到一孔六孔板上，细胞贴壁率很低不足20%，或者更严格的说只有10%，这个主要原因是细胞状态吗，还是操作有问题？对于这样需要融合度为多少合适，60%？80%，大概需要生长几天？还是电转前一天高密度接种第二天消化电转。消化我发现使用 TrypLE酶不容易吹打为单细胞，是不是 accutase 更好些？+ x  `& t# h: v; |: C# ^( }4 U
2、电转液为一般的盐溶液，是这边的实验室的 protocol，具体配置不知道，转别的细胞是没有问题的。使用 bio-rad 的仪器用 PBS 作为电转液，效率也挺好的。这个是不是需要自己摸索，有钱直接买kit 是不是更好？
* Q* \3 u6 y3 u6 I% v3 `3、现在处于预实验，摸索条件做细胞梯度好还是质粒梯度更好？
# {: A2 J0 X  m" ~4、电转实验细节上有没有特别好的建议希望分享一下，
) m- b* R0 s; H, P  v2 w5 B; C6 q
说的有点乱，还请不介意，期待您的回复

canyon

Jonathan 发表于 2014-3-13 14:27   W$ S0 L& _$ B8 F* z  d
回复 sirius_zou 的帖子
+ v, e1 Q. L& Z
( [& A9 z0 k  f! M' Z0 \我用了6ug。1m的CD34+cell。完全没问题。细胞会死一些。ips出的杠杠的

9 c' A6 }# ~5 }1 v2 g, fJonathan, 你的CD34+细胞的分离一般需要多少ml血液？

genedu

回复 刘金莹 的帖子& f1 J5 Y; B4 ]9 x# @4 \/ i9 R
4 c* O2 [+ d- I& U- p% i
真是对不起，真没电转过神经干，不过电转程序可以参考lonza网站

刘金莹

回复 genedu 的帖子1 ^5 Z2 n9 r5 c3 u: X7 c
  `( R  n2 j, E  ^/ ]% e; g
请问  您做过神经干细胞的电转吗？ lipo2000的效率在1%左右