mSSC体外培养求助

w343989328

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, ]8 `: I6 ]/ F& O% L养了半年mSSC，由于实验室刚建立这个平台，没有太多经验，而且曲细精管移植还没有做过。这半年来体系不稳定，养SSC出现过各种形态，发些照片求有经验的前辈们鉴定一下。/ C- j. i8 _7 J/ e1 a2 n. P

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第3排、第4排和第6排的mSSCs形态不错；
, l' S9 b) r- T2 Q& ?# _第一排的细胞状态已经不好了，估计是差不多了；: H& @4 e  m2 ?( i- i9 J9 U! ^2 f! ?
第二排的细胞中杂质太多，影响纯度，估计还有一部分死细胞和分化的细胞；
+ T& Q5 T: _. ^9 y6 }" q4 \第三排的细胞最好，细胞圆润，核质比大，细胞簇形态与SSCs细胞簇形态特异性高；
( `- E# L) o0 P/ c$ |( ?& C; Y第四排的细胞还行；2 ~' U0 X! Z% m9 W" T
第五排的细胞还凑合，就是ES-like的克隆有点散，貌似分化；" O/ n& M+ A/ D# Q9 j5 l8 E3 f
第六排的细胞ES-like的克隆比较好，估计有可能是mSSCs向ES-like转化了，可以检测一下，这个是有文献报道可行的；- d. b$ J% D& _
第七排的细胞感觉基本上没几个活细胞，状态不太好；
( r# j3 O; F; O  }& l  T) V第八排的细胞密度太高，看不出来什么情况，不好评价；
$ j2 c& G* |7 ^( O; q5 u以上内容纯属个人意见，仅供参考6 _# j. M9 `5 [- a

我爱火热的冬天

你这个是不是使用差贴后养的？有没有在饲养层上养？贴几张在饲养层上养的照片看看

w343989328

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用的磁珠。。你看看上面没滋养层么？

我爱火热的冬天

我以为差贴后直接培养的呢，你饲养层的密度是不是有些稀呢？对了，你有没有做流式检测，我也在做这方面的实验，想多交流下，多学习

我爱火热的冬天

我以为差贴后直接培养的呢，你饲养层的密度是不是有些稀呢？对了，你有没有做流式检测，我也在做这方面的实验，想多交流下，多学习

w343989328

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流式检测什么呢？我们现在鉴定的方法有RT-PCR WB IF，还有准备做曲细精管移植

我爱火热的冬天

流式检测你用磁珠分选的细胞的结合率，这个可以用美天旎的cd90-fitc，我不知道有没有必要用其他抗体进行检测，因为可以做免疫细胞化学进行检测，只是得不到比例，用流式可以得到比例，我做的思路和你的也差不多，只是不知道WB IF是如何检测的，之前看文章没有看到用这种方法，对了，你们的实验室在哪里，移植技术成熟吗？只是做小鼠的会不会太没意思，毕竟国外在小鼠上非常成熟了

hai344239012

我觉得你的SSC养得非常的不好9 b  }+ x/ I7 J6 l. ^/ f
可能 feeder 做的不好 建议重新做做 做过支原体检测吗？

w343989328

回复 hai344239012 的帖子$ M9 R( p3 v. r
5 S' ]+ T# ^5 a# I3 P7 s
嗯，谢谢你！我现在已经可以养出来了。上面那些都是失败的范例，确实是滋养层太差了