mSSC体外培养求助

w343989328

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" L/ N4 E- ?- [8 d% Q) S  i养了半年mSSC，由于实验室刚建立这个平台，没有太多经验，而且曲细精管移植还没有做过。这半年来体系不稳定，养SSC出现过各种形态，发些照片求有经验的前辈们鉴定一下。
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jhu132llh

第3排、第4排和第6排的mSSCs形态不错；1 O3 B5 E* _% g4 F/ V4 F" t' O! G
第一排的细胞状态已经不好了，估计是差不多了；6 {6 [  z0 B/ v* l& U; N; w0 k
第二排的细胞中杂质太多，影响纯度，估计还有一部分死细胞和分化的细胞；4 F) i7 O( t/ G/ b
第三排的细胞最好，细胞圆润，核质比大，细胞簇形态与SSCs细胞簇形态特异性高；
! k$ F! U4 X9 j; C第四排的细胞还行；; P1 Q5 p5 ?1 e* c# G( z
第五排的细胞还凑合，就是ES-like的克隆有点散，貌似分化；
8 c4 t0 [. L, ^5 k5 j& T5 K0 v第六排的细胞ES-like的克隆比较好，估计有可能是mSSCs向ES-like转化了，可以检测一下，这个是有文献报道可行的；
' i* k  i0 e$ c' }第七排的细胞感觉基本上没几个活细胞，状态不太好；
4 P9 k6 ~. Y) t. ~4 T第八排的细胞密度太高，看不出来什么情况，不好评价；
. x/ i  p: X+ O" t8 \以上内容纯属个人意见，仅供参考. x6 D" o! _, Q0 g% G1 ^/ l# b

我爱火热的冬天

你这个是不是使用差贴后养的？有没有在饲养层上养？贴几张在饲养层上养的照片看看

w343989328

回复 我爱火热的冬天 的帖子/ W: f) }2 e2 R1 y3 A+ w, c+ x) q
  o) I; g' b4 ?+ {" R
用的磁珠。。你看看上面没滋养层么？

我爱火热的冬天

我以为差贴后直接培养的呢，你饲养层的密度是不是有些稀呢？对了，你有没有做流式检测，我也在做这方面的实验，想多交流下，多学习

我爱火热的冬天

我以为差贴后直接培养的呢，你饲养层的密度是不是有些稀呢？对了，你有没有做流式检测，我也在做这方面的实验，想多交流下，多学习

w343989328

回复 我爱火热的冬天 的帖子8 K$ S1 g) p" V) X0 X

  n+ g; w0 T- @( V. c) i流式检测什么呢？我们现在鉴定的方法有RT-PCR WB IF，还有准备做曲细精管移植

我爱火热的冬天

流式检测你用磁珠分选的细胞的结合率，这个可以用美天旎的cd90-fitc，我不知道有没有必要用其他抗体进行检测，因为可以做免疫细胞化学进行检测，只是得不到比例，用流式可以得到比例，我做的思路和你的也差不多，只是不知道WB IF是如何检测的，之前看文章没有看到用这种方法，对了，你们的实验室在哪里，移植技术成熟吗？只是做小鼠的会不会太没意思，毕竟国外在小鼠上非常成熟了

hai344239012

我觉得你的SSC养得非常的不好- E0 @: [7 ]0 ?4 S  i4 G2 I
可能 feeder 做的不好 建议重新做做 做过支原体检测吗？

w343989328

回复 hai344239012 的帖子
8 a* m- q4 v: `! l) E: D3 f- k: D- J% }1 }* g( ~1 p
嗯，谢谢你！我现在已经可以养出来了。上面那些都是失败的范例，确实是滋养层太差了